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食品中霉菌和酵母的快速计数测试片法

1范围

本文件规定了霉菌和酵母(moldsandyeasts)的快速计数测试片法。本文件适用于食品中霉菌和酵母的快速计数。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数

3术语和定义

GB4789.15界定的术语和定义适用于本文件。

4设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a)培养箱：28℃±1℃;

b)恒温水浴装置：46℃±1℃;

c)天平：感量为0.1g;

d)均质器及均质袋；e)振荡器；

f)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；

g)无菌锥形瓶：容量500mL;

h)放大镜或测试片判读仪。5培养基和试剂

5.1PetrifilmTM快速霉菌酵母测试片：见附录A。

5.2磷酸盐缓冲液：见附录B中的B.1。5.3无菌生理盐水：见B.2。

6检验程序

检验程序见图1。

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图1霉菌和酵母的检验程序

7操作步骤

7.1样品的稀释

7.1.1固体和半固体样品：称取25g样品置于盛有225mL无菌稀释液（磷酸盐缓冲液或生理盐水）的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL无菌稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

7.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置于盛有225mL无菌稀释液的无菌锥形瓶（可在瓶内

预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，或放入盛有225mL无菌稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

7.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL无菌稀

释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管或无菌吸头反复吹打使其混合均匀，制成1∶100的样品匀液。

7.1.4按7.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或

吸头。

7.2加样

根据对样品污染状况的估计，选择2~3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）进行测定。具体操作步骤按照测试片使用说明进行，每个稀释度加样到两个测试片，同时吸取1mL空白稀释液加入测试片做空白对照。

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7.3培养

将测试片的正面朝上，水平置于培养箱内，最多可堆叠20片，28℃±1℃,培养48±2h。

7.4计数

7.4.1培养结束后立即计数，可肉眼直接观察计数，必要时用放大镜或测试片判读仪辅助计数。记录

稀释倍数和相应霉菌和酵母数，以菌落形成单位(colonyformingunits,CFU)表示。

7.4.2选取菌落数为10CFU~150CFU的测试片，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母的菌落数。

8结果与报告

8.1结果

8.1.1计算同一稀释度的两个测试片上的菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数。

8.1.2若有两个连续稀释度的测试片菌落数均为10CFU~150CFU,按公式(1)计算：

…………(1)

式中：

N—样品中菌落数；

ΣC—测试片（含适宜范围菌落数的测试片）菌落数之和；n1—第一稀释度（低稀释倍数）测试片个数；

n2—第二稀释度（高稀释倍数）测试片个数；d—稀释因子（第一稀释度）。

8.1.3若所有稀释度的测试片上菌落数均大于150C