昆虫抗性监测与治理.ppt

基于GST的快速测定法

GST活性生化测定比较复杂，而且要用分光光度计等仪器才能测定。最近Vontas等（2000）发展了一种简便的定量测定的GST活性的方法，也可用于单个昆虫的测定。在测定中应用GSH和CDNB在一个固定时间内获得线性的酶反应后，在化学计量上应用碘(滴度)法（iodometrictitration）测定游离的GSH，最后从不同的颜色范围获得测定结果。即用碘的滴度来测定GSH。用淀粉作为内指示剂，因为在淀粉溶液中碘化汞抑制GST活性，终止酶反应。Brogdon和Barber(1990)应用微量滴度板测定了单个蚊虫的GST活性。3.抗性早期诊断技术第37页,共64页，星期六，2024年，5月基于乙酰胆碱酯酶的测定方法以模型底物乙酰硫代胆碱碘化物和5,5′-二硫-双（2-硝基苯酸）进行Ellman反应(Ellman等，1961),在存在少量AChE时产生黄色（OD412）。这种技术可用于检测不敏感的AChE。如果单个昆虫的样品一分为二，一个样品在反应混合液中含有一个诊断浓度的杀虫剂；而另一个样品的反应液中仅含有底物（无杀虫剂），根据有无产生黄色，则可区分不同敏感性的变异体。这种技术在几种昆虫中已作了测定，并运用动力学软件作了进一步改进，采用微量孔板读数系统（microplatereadersystem）进行自动检测，可检测单个昆虫的抗性基因型。斑点印迹（dot-blot）检测技术也已用于检测田间抗性个体的AChE。3.抗性早期诊断技术第38页,共64页，星期六，2024年，5月

基于Kdr的电生理测定方法

应用电生理技术检测Kdr。通常运用昆虫的神经肌肉制备体来测定自发性微小兴奋性后突触电位（miniatureexcitatorypostsynapticpotentials，mEPSPs）和对不同浓度的拟除虫菊酯或滴滴涕杀虫剂反应引发的兴奋性后突触电位（EPSPs）。细胞内记录显示拟除虫菊酯诱发mEPSP活性增加，而EPSP值下降，而在抗性昆虫中要高浓度才能诱发。然后与敏感昆虫相比较，就能检测有无Kdr存在。3.抗性早期诊断技术第39页,共64页，星期六，2024年，5月基于PCR的抗性检测的诊断技术特异性等位基因的PCR扩增（PCRamplificationofspecificalleles，PASA）单链构象多态性分析（singlestrandedconformationalpolymorphism,SSCP）PCR限制性内切酶核苷酸(PCRrestrictionendonucleasenucleotide,PCR/REN)分析法（详见唐振华和毕强编著的《杀虫剂作用的分子行为》，2003）3.抗性早期诊断技术第40页,共64页，星期六，2024年，5月抗性种群的演化4.出抗性治理策略第41页,共64页，星期六，2024年，5月影响抗性演化的主要因子遗传学生物学/生态学操作4.出抗性治理策略第42页,共64页，星期六，2024年，5月遗传学1.抗性等位基因频率?2.抗性等位基因数目?3.抗性等位基因的显性?4.外显性(penetrance)、表达性(expressivity)、抗性等位基因的相互作用?5.过去使用其它杀虫剂的选择作用?6.抗性基因组与适合度因子整合作用的程度，即抗性基因型和表现型在有或无杀虫剂时的适合度(fitness)4.出抗性治理策略第43页,共64页，星期六，2024年，5月生物学/生态学?生物/生态学1.繁殖力，包括世代的长短和每代的虫数?2.单配性/多配性；孤雌生殖?3.气候和其它生态条件行为1.隔离；移动性；迁飞?2.单食性/多食性?3.幸存；庇护4.出抗性治理策略第44页,共64页，星期六，2024年，5月操作因子?化合物1.杀虫剂的化学性质?2.用药历史?3.杀虫剂的残效期?4.剂型施药情况1.施药的限阈?2.选择限阈?3.施药时的虫期（卵、幼虫或成虫）?4.限制防治空间?5.施药方式?6.用药次数4.出抗性治理策略第45页,共64页，星期六，2024年，5月抗性治理的策略根据不同的具体情况分为3类：①适度治理（managementbymoderation）②饱和治理（managementbysaturation）③复合作用治理（ma