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高效液相色谱法测定藿香正气口服液中橙皮苷含量

一、1.药物与试剂

(1)藿香正气口服液为常用中成药，主要成分包括藿香、苍术、厚朴等，具有解表化湿、理气和中之功效。本实验中使用的藿香正气口服液由某制药厂生产，批号规格为每瓶10ml。该口服液橙皮苷含量标准规定为每瓶不少于5mg，以确保药物疗效。

(2)实验所用的橙皮苷对照品购自中国药品生物制品检定所，批号为110721-201811，含量测定结果显示纯度为98.5%。溶剂甲醇为色谱纯，购自德国默克公司，批号为1.05415。实验用水为超纯水，电阻率≥18.2MΩ·cm，由实验室自备纯水机提供。

(3)实验过程中，还使用了以下试剂：磷酸、醋酸、氨水等，均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。此外，实验过程中使用的玻璃仪器如色谱柱、进样器、比色皿等均需经过严格的清洗和消毒，以确保实验结果的准确性和可靠性。例如，色谱柱在使用前需用甲醇、水、磷酸梯度淋洗，进样器需用乙醇清洗，比色皿需用稀盐酸浸泡。

二、2.仪器与设备

(1)本实验中使用的仪器主要包括高效液相色谱仪（HPLC），该仪器由美国Waters公司生产，型号为Waters2695，配备Alliance2695泵、2998二极管阵列检测器（DAD）和Waters2487示差折光检测器（RID）。高效液相色谱仪是进行分离和定量分析的重要设备，具有高效、灵敏、准确的特点。此外，色谱仪配备的自动进样器型号为Waters717Plus，用于自动进样，减少人为误差。

(2)实验过程中，还使用了以下辅助设备：柱温箱，型号为Waters2487，用于保持色谱柱温度恒定，确保实验结果的重复性；真空泵，型号为德国Küntzle公司生产，用于脱气处理，去除溶剂中的溶解氧，防止氧化反应；超声波清洗器，型号为德国Elmasonic公司生产，用于清洗玻璃仪器，确保实验用液纯净无污染；电子天平，型号为德国Sartorius公司生产，精确度为0.1mg，用于称量样品和试剂。

(3)实验室的其他设备包括：电热恒温水浴锅，用于溶解样品和试剂；旋转蒸发仪，用于浓缩溶液；移液器，包括10μl、100μl、1000μl等多种规格，用于准确移取溶液；容量瓶，包括10ml、25ml、50ml、100ml等规格，用于配制标准溶液；以及各种规格的色谱柱，如C18、C8等，用于不同样品的分离分析。所有设备在使用前均需进行校准和检查，确保实验数据的准确性。

三、3.实验方法

(1)本实验采用高效液相色谱法测定藿香正气口服液中橙皮苷的含量。首先，取藿香正气口服液适量，用甲醇稀释至适宜浓度，经过0.45μm的滤膜过滤，得到待测样品溶液。橙皮苷对照品用甲醇溶解，制备成一定浓度的对照品溶液。色谱柱选用C18柱，柱温设置为30℃，流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液，流速为1.0ml/min。在检测波长为285nm下进行检测，理论塔板数不低于5000。

(2)实验中，分别取不同浓度的橙皮苷对照品溶液进行测定，以峰面积（y）对浓度（x）进行线性回归，得到线性方程y=23453x-515.5，相关系数R2为0.999，表明在实验浓度范围内线性关系良好。同时，对藿香正气口服液样品进行测定，重复测定6次，平均峰面积为6457.8，根据线性方程计算橙皮苷含量为2.98mg/ml，与标准规定每瓶不少于5mg的要求相符。

(3)对藿香正气口服液中橙皮苷的精密度进行考察，重复测定同一批次样品6次，RSD为1.8%，表明本实验方法具有良好的精密度。同时，对样品进行稳定性考察，在室温下放置12小时后再次测定，峰面积RSD为1.2%，说明样品在实验条件下稳定。此外，对实验方法进行回收率考察，加入不同量的橙皮苷对照品到藿香正气口服液中，测定回收率，结果显示平均回收率为98.5%，RSD为1.6%，表明本实验方法具有良好的回收率。

四、4.结果与讨论

(1)通过高效液相色谱法对藿香正气口服液中橙皮苷的含量进行测定，实验结果显示，该方法能够有效分离和定量橙皮苷。在实验过程中，我们对不同批次和不同规格的藿香正气口服液进行了含量测定，结果显示橙皮苷含量在2.8mg/ml至3.2mg/ml之间，平均含量为3.0mg/ml，符合国家药典规定的含量要求。以某批次藿香正气口服液为例，其橙皮苷含量测定结果为2.95mg/ml，与理论值相比，相对误差为0.5%，表明本实验方法具有较高的准确性和可靠性。

(2)在实验过程中，我们对色谱柱进行了优化，通过改变流动相比例、流速和柱温等条件，最终确定了最佳分离条件。在此条件下，橙皮苷的保留时间为8.5分钟，峰面积与浓度的线性关系良好，相关系数R2达到0.999。此外，我们还对实验方法的精密度、准确度和稳定性进行了考察。结果显示，该方