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褐藻酸寡糖含量的测定

A.1方法原理

褐藻酸寡糖在酸性条件下可以水解生成糖醛酸，糖醛酸在强酸条件下与间羟基联苯（3-phenylphenol）

发生缩合反应，生成紫红色衍生物，在波长525nm处和一定浓度范围内，该衍生物的吸收值与糖醛酸

浓度呈线性关系。

A.2试剂和溶液

A.2.1间羟基联苯

A.2.2浓硫酸

A.2.3四硼酸钠

A.2.4氢氧化钠

A.2.5半乳糖醛酸标准品，≥97.0%（m/m）

A.2.6半乳糖醛酸标准溶液

准确称取半乳糖醛酸0.010g，置于100mL烧杯中，用25mL双蒸水溶解后转移至100mL容量瓶

中，用25mL双蒸水洗涤烧杯内壁，并入到容量瓶中，重复此步骤2次，最后用双蒸水定容至100mL，制

得0.100g/L半乳糖醛酸标准溶液。

A.2.7120mM四硼酸钠-硫酸溶液

准确称取十水合四硼酸钠4.576g，置于100mL烧杯中，用50mL浓硫酸溶解后转移至100mL容

量瓶中。用20mL浓硫酸洗涤烧杯内壁，并入到容量瓶中，重复此步骤2次，最后用浓硫酸定容至100

mL，制得120mM四硼酸钠-硫酸溶液。

A.2.80.5%氢氧化钠溶液

称取0.5g氢氧化钠，溶于100mL蒸馏水中。

A.2.90.15%间羟基联苯溶液

称取间羟基联苯0.15g，溶于100mL0.5%氢氧化钠溶液中，置于棕色瓶中，阴暗处保存。

A.3仪器和设备

A.3.1分光光度计

A.3.2恒温水浴锅

可控温度在0-120℃。

A.4测定步骤

A.4.1半乳糖醛酸标准曲线制作

取10mL带螺旋盖试管，分别加入半乳糖醛酸标准溶液0、0.10、0.20、0.30、0.40mL，再分别用

双蒸水补充到总体积为0.4mL，混匀，得到浓度为0、25、50、75、100μg/mL的半乳糖醛酸梯度溶液。

将溶液置于冰水浴中，在每个试管中缓慢加入120mM四硼酸钠-硫酸溶液2.40mL，加盖，混匀。将试

管浸入沸水浴中加热，准确煮沸20分钟（自水浴重新煮沸起计时），用自来水冷却，室温放置10min

左右。在每个试管中加入80μL0.15%间羟基联苯溶液作为显色剂，混匀，室温放置10min，以双蒸水

为空白，在525nm波长处比色测定吸光度。以吸光度为纵坐标、每毫升半乳糖醛酸梯度溶液中的糖醛

酸含量（微克数）为横坐标，制得标准曲线。

A.4.2待测样品中糖醛酸含量测定

准确称取固体样品0.050g（液态样品称取0.250g）（样品质量，记为m，单位g），置于100mL

烧杯中，用25mL双蒸水溶解后转移至1000mL容量瓶中，用25mL双蒸水洗涤烧杯内壁，并入到容

量瓶中，重复此步骤2次，最后用双蒸水定容至1000mL，制得0.050g/L样品溶液。取该样品溶液0.40mL

加入10mL带螺旋盖试管中，置于冰水浴中，缓慢加入四硼酸钠-硫酸溶液2.40mL，加盖，混匀。将样品溶

液与标准溶液试管一起浸入沸水浴中加热，准确煮沸20min（自水浴重新煮沸起计时），用自来水冷却，

室温放置10min左右。在每个试管中加入80μL0.15%间羟基联苯，混匀，室温放置10min，以双蒸水为空

白，在525nm波长处比色测定吸光度。以吸光度查标准曲线，得每毫升样品溶液的糖醛酸含量（微克数，

记为C）。

注：半乳糖醛酸只有在浓硫酸中才可使其显色，且颜色深浅与浓硫酸浓度和纯度有关。故在测定样品和

制作标准曲线时，应使用同规格、同批号的浓硫酸，以保证其浓度、纯度一致；每次样品测定应同时进行标

准曲线的制作。

A.5结果与计算

褐藻酸寡糖的质量分数X（%），按下式计算：

1

×103

=×100

1×106

式中：

C-从标准曲线查得每毫升样品溶液的糖醛酸含量，μg；

m-称取的样品质量，g；

3

10-1L体积换算为1000mL；

6

10-μg换算为g。

A.6允许差

两次平行测定结果相对偏差不超过5%。