DB12T 647-2016 大白菜品种纯度SSR分子标记检测方法.pdfVIP

ICS67.050

B31DB12

天津市地方标准

DB12/T647—2016

大白菜品种纯度SSR分子标记检测方法

MethodsofidentifyingvarietalpurityofChinesecabbagebyusingSSR-basedmarkers

2016-09-27发布2016-11-01实施

天津市市场和质量监督管理委员会发布

DB12/T647—2016

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由天津市农村工作委员会提出。

本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、天津市蔬菜研究中心。

本标准主要起草人：赵新、王超楠、兰青阔、王成、刘莉莉、朱珠、李梅、陈锐、徐石勇。

本标准2016年9月首次发布。

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DB12/T647—2016

大白菜品种纯度SSR分子标记检测方法

1范围

本标准规定了大白菜品种纯度SSR分子标记检测方法的术语和定义、检测方法、纯度计算方法。

本标准适用于大白菜单交种的纯度检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本

文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

品种纯度varietiespurity

品种纯度指种子在SSR分子标记带型方面典型一致的程度，用具有本品种特异带型的种子粒数占

检测样品种子粒数的百分率表示，以反映某品种特征特性的一致性程度。

3.2

聚合酶链式反应polymerasechainreaction（PCR）

一种在体外通过酶促反应扩增特异DNA片段的技术。

3.3

简单重复序列simplesequencerepeat（SSR）

由几个核苷酸（1-6个）为重复单位聚集而成的长达几十个至几百个bp（一般为100-200bp）的串

联重复序列，又称微卫星序列或短串联重复序列，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。

3.4

分子标记molecularmarker

以蛋白质、核酸分子的多态性为基础，检测生物在遗传上的差异。

4原理

SSR分布于大白菜整个基因组，每个位点上重复单位的数目不同造成了品种间的多态性，利用PCR

技术将多态的SSR扩增出来，通过电泳检测扩增产物，利用电泳图谱进行大白菜品种纯度检测。

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DB12/T647—2016

5仪器设备及试剂

5.1仪器设备

PCR仪；测序电泳槽；水平电泳槽；高压电泳仪（3000V，400mA，400W）；万分之一电子天

平；微量加样器；磁力搅拌器；台式离心机；紫外-可见成像系统；胶片观察灯；水平摇床；高压灭菌

锅；pH计等。

5.2试剂

乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；盐酸（HCl，36%）；十二烷基

硫酸钠（SDS）；氯化钠（NaCl）；氢氧化钠（NaOH）；硼酸；去离子甲酰胺；溴酚蓝；