枯草杆菌生物兴趣小组 (2).ppt

枯草杆菌培养基电镜图片形态特征第6页,共34页，星期六，2024年，5月革兰氏染色法第7页,共34页，星期六，2024年，5月细菌介绍芽孢具有厚而致密的壁，透性差，含水量低，折光性强，不易着色。在加热条件下加入着色力强的染料，让芽孢、菌体与染料作用较长时间，使芽孢染上颜色，再使菌体的颜色脱去；然后再用另一种与前者颜色不同的对比度强的染料对菌体复染，使芽孢和菌体分别呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，以便观察。荚膜是一层覆盖在某些细菌细胞壁表面的粘性物质，主要成分是多糖类。荚膜与染料的亲合力较差，不易着色。荚膜的通透性好，某些染料可透过荚膜而使菌体着色。因此，常采用负染色法将菌体和背景着色而荚膜不着色，因而荚膜在菌体周围呈一透明无色圈。细菌鞭毛非常纤细，直径10-20nm，只能在电子显微镜下才能观察到。但采用特殊的染色法在光学显微镜下也能见到。其原理是：在染色前先用媒染剂处理，使媒染剂沉积在鞭毛上，将鞭毛加粗，然后再进行染色，便能在油镜下看见鞭毛的形状和着生方式。第8页,共34页，星期六，2024年，5月原理第9页,共34页，星期六，2024年，5月第10页,共34页，星期六，2024年，5月基本原理革兰氏染色法是一种鉴别性的染色方法。结果细胞保留初染剂篮紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞为复染剂的颜色（红色），则为革兰氏阴性菌。其机理是由于细菌细胞壁的化学组成及结构不同和通透性不同的缘故。细菌的革兰氏染色受菌龄、培养基pH值和染色技术等因素的影响，并非固定不变。第11页,共34页，星期六，2024年，5月三、器具材料1.器材：显微镜、擦镜纸、二甲苯、香柏油、接种环、酒精灯、火柴、吸水纸、载破片、盖玻片。2.染色液及试剂:结晶紫染色液、路戈氏碘液、95%的酒精、番红染色液、蒸馏水。碱性复红染色液、5%孔雀绿染色液。3.菌种；培养18小时至20小时的枯草芽孢杆菌、苏云金杆菌、大肠杆菌的新鲜斜面菌种。培养24小时至36小时的枯草杆菌或苏云金杆菌、巨大芽孢杆菌。第12页,共34页，星期六，2024年，5月细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染,在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性化合物，可增加染料和细菌的亲和力。第13页,共34页，星期六，2024年，5月实验过程1、?取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

2、?涂片：

液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。

3、?晾干：让涂片在空气中自然干燥。

4、?固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。5、?染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。

6、?水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。

8、?脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。

9、?复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束。

第14页,共34页，星期六，2024年，5月观察荚膜和鞭毛标本片周生荚膜一端生一束第15页,共34页，星期六，2024年，5月第16页,共34页，星期六，2024年，5月1.1培养基

牛肉膏蛋白胨液体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，1000mL蒸馏水，pH7.2—7.5。牛肉膏蛋白胨固体培养基：5g牛肉膏，10g蛋白胨，5gNaCl，20g琼脂,1000mL蒸馏水，pH7.2—7.5。1号培养基：3g木屑,0.4g葡萄糖,0.2g蛋白胨,0.2g酵母膏,0.2gCaCO3,0.1gKH2PO4,16mL水。2号培养基：3g稻草,0.4g葡萄糖,0.2g蛋白胨,0.2g酵母膏,0.2gCaCO3,0.1gKH2PO4,16mL水。3号培养基：3g玉米芯,0.4g葡萄糖,0.2g蛋白胨,0.2g酵母膏,0.2gCaCO3,0.1gKH2PO4,16mL水。