方法比较试验.ppt

一.实验目的1.掌握本实验的实验原理；2.掌握两种不同操作方法的操作过程；3.了解血清葡萄糖测定的临床意义；4.学会应用分光光度计对各组数据进行统计处理。第2页,共20页，星期六，2024年，5月二.实验原理方法比较试验是将候选方法与准确度已知的方法（如参考方法或经典方法）作对比分析,同时测定一批标本计算出两种方法间测定结果的差值，以评价候选方法的准确度，是考核候选方法是否可被采用的重要试验。用于检测候选方法的恒定误差和比例误差，如对适当的数据进行分析也可以提供误差的性质，本实验以邻甲苯胺法作为比较方法，评价GOD-POD法测定血糖的总系统误差第3页,共20页，星期六，2024年，5月邻甲苯胺法测定血糖原理：在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺(O-T)缩合成糖基胺，经脱水，生成希夫碱（Schiffbase），经分子重排生成蓝绿色化合物，在630nm波长处有一吸收峰，吸光度大小在一定范围内与血糖浓度成正比。 邻甲苯胺+葡萄糖葡萄糖基胺希夫碱蓝绿色化合物缩合脱水第4页,共20页，星期六，2024年，5月三.试验试剂器材1.邻甲苯胺试剂2.GOD-POD法试剂盒3.待测血清四种含血糖浓度不同的血清：2.2mmol/L、6.7mmol/L、5.2mmol/L、3.7mmol/L.4.葡萄糖标准液（5.55mmol/L）5.其它：移液器、可见分光光度计、水浴箱等第5页,共20页，星期六，2024年，5月四、操作步骤1．每人随机选择血糖含量高低不同的病人血清标本2份。2．将每份标本分别用两种方法各测定2次。将标本按某次序排列先测一次，第2次测定时，标本顺序全部倒过来。例如，第1次序号为1、2、3、4、5、6、7、8，第2份序号为8、7、6、5、4、3、2、1。3．计算出两法各自的测定结果第6页,共20页，星期六，2024年，5月具体操作如下：GOD-POD法；加入物空白管S(标)U1(测)U2(测)DDW10ul---5mmol/L(糖标)-10ul--待测血清--10ul10ul试剂（酶酚）1.5ml1.5ml1.5ml1.5ml混匀后置370C水浴15min,于505nm处比色，空白管调零，读取吸光度值。第7页,共20页，星期六，2024年，5月O-T法(邻甲苯胺法)；加入物空白管S(标准管)U1(测)U2(测)DDW0.1ml---5mmol/L糖标-0.1ml--待测血清--0.1ml0.1ml邻甲苯胺试剂3ml3ml3ml3ml混匀后放入沸水中煮沸5min，取出置冷水中冷却3min，于630nm处比色，以空白管调零，读取吸光度值。第8页,共20页，星期六，2024年，5月五、结果计算测定管吸光度血清葡萄糖=×5mmol/L