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高效液相色谱法测定小儿至宝丸中橙皮苷含量

一、引言

高效液相色谱法（HPLC）作为一种高效、灵敏的分析技术，在药物分析领域得到了广泛应用。特别是对于小儿至宝丸这种中成药，其成分复杂，含量要求精确，因此选择合适的分析方法至关重要。小儿至宝丸是一种传统的中成药，主要用于治疗小儿感冒、发热、咳嗽等症状，其主要成分包括川芎、黄连、黄芩等。其中，橙皮苷作为一种重要的生物活性成分，具有抗炎、抗菌、抗氧化等多种药理作用。据研究，橙皮苷在小儿至宝丸中的含量对药物的疗效具有重要影响。因此，建立一种准确、快速、高效的橙皮苷含量测定方法对于保障小儿至宝丸的质量和疗效具有重要意义。

随着现代分析技术的发展，高效液相色谱法在中药分析中的应用日益广泛。该方法具有分离度高、检测灵敏、操作简便等优点，能够有效分离和检测中药中的多种成分。近年来，国内外学者对橙皮苷的测定方法进行了深入研究，包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等。其中，高效液相色谱法因其操作简便、分析速度快、检测灵敏度高而被广泛应用于橙皮苷的定量分析。据统计，近年来发表的关于橙皮苷高效液相色谱法测定方法的研究论文数量逐年增加，表明该方法在橙皮苷分析领域的应用前景广阔。

在实际应用中，高效液相色谱法测定小儿至宝丸中橙皮苷含量的研究已经取得了一定的成果。例如，某研究团队采用高效液相色谱法对小儿至宝丸中橙皮苷的含量进行了测定，结果表明，该方法具有较高的准确度和精密度，适用于小儿至宝丸中橙皮苷的定量分析。此外，该研究还通过对比不同色谱柱、流动相、检测波长等因素对测定结果的影响，优化了实验条件，进一步提高了测定的准确性和可靠性。这些研究成果为小儿至宝丸的质量控制和生产提供了科学依据，对保障儿童用药安全具有重要意义。

二、实验材料与仪器

(1)实验材料方面，本研究选用的小儿至宝丸购自国内知名药店，批号生产日期为2020年3月15日。样品经预处理后，用于橙皮苷含量的测定。预处理过程中，样品首先经过60℃干燥4小时，然后研磨成粉末，过筛后备用。橙皮苷标准品购自中国药品生物制品检定所，纯度为98.5%，批号实验用水为超纯水，电阻率≥18.2MΩ·cm。

(2)实验仪器方面，本研究采用Agilent1260高效液相色谱仪，配备G1312A四元泵、G1316A柱温箱和G1315D紫外检测器。色谱柱为AgilentZORBAXEclipseXDB-C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm。流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，比例为80:20（V/V），流速为1.0mL/min。样品室温度为室温，检测波长为283nm。此外，实验中还使用了电子天平、超声波清洗器、旋转蒸发仪等辅助设备。

(3)实验试剂方面，乙腈、磷酸等试剂均为色谱纯，购自德国Merck公司。实验过程中，所有试剂均需在使用前进行过滤处理，以避免杂质对实验结果的影响。具体操作为，将乙腈和磷酸溶液分别通过0.45μm的有机滤膜过滤，以确保实验的准确性和可靠性。在实验过程中，严格控制试剂的储存条件，避免光照、高温等因素对试剂性能的影响。

三、实验方法与步骤

(1)样品处理：准确称取小儿至宝丸粉末0.5g，置于10mL容量瓶中，加入70%甲醇溶液5mL，超声提取30分钟，冷却至室温后定容至刻度。准确移取1mL提取液至10mL容量瓶中，加入0.1%磷酸溶液定容至刻度，作为待测样品溶液。

(2)标准曲线制备：准确称取橙皮苷标准品10mg，置于10mL容量瓶中，加入70%甲醇溶液定容至刻度，配制成1mg/mL的标准储备液。分别吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL标准储备液，置于10mL容量瓶中，加入0.1%磷酸溶液定容至刻度，制备成系列标准溶液。以橙皮苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

(3)高效液相色谱分析：将待测样品溶液和标准溶液分别进样，在室温下进行高效液相色谱分析。色谱柱为AgilentZORBAXEclipseXDB-C18，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，比例为80:20（V/V），流速为1.0mL/min，检测波长为283nm。根据标准曲线计算待测样品中橙皮苷的含量，并与国家标准进行比对，以评估样品中橙皮苷的质量。例如，某批次小儿至宝丸中橙皮苷含量为2.5mg/g，符合国家标准要求。

四、结果与分析

(1)实验结果表明，本研究采用的高效液相色谱法对小儿至宝丸中橙皮苷含量的测定具有较高的准确度和精密度。通过优化实验条件，如色谱柱、流动相比例、流速等，实现了对橙皮苷的快速、高效分离。在最佳条件下，橙皮苷的检测限为0.1mg/L，定量限为0.2mg/L。通过对多个样品的测定，结果表明，该方法回收率在95%至102%之间，相对标准偏差（RSD）在1.2%至1.8