普通仪和荧光定量仪的使用.ppt

PCR概念利用DNA聚合酶、一对引物和四种dNTP（三磷酸脱氧核苷酸），对模板DNA反复多次地进行复制，从而得到大量扩增产物的反应过程，称为PCR。PartIIPCR原理第5页,共36页，星期六，2024年，5月PartIIPCR原理PCR反应五要素引物（primer）酶（TaqDNApolymerase）dNTP（dATP,dGTP,dCTP,dTTP）Mg2+（magnesium）模板（template）第6页,共36页，星期六，2024年，5月PartIIPCR原理PCR扩增的基本反应步骤1、变性：加热至95oC左右，使模板DNA变性。2、退火：降低温度至适合的温度（55oC左右，引物与模板DNA的互补序列配对结合。3、延伸：温度在70oC左右时，TaqDNA聚合酶从引物3端催化复制链以5-3方向延伸。第7页,共36页，星期六，2024年，5月1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1-3步25-30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍PartIIPCR原理第8页,共36页，星期六，2024年，5月PartIIPCR原理PCR原理PCR的理论方程：Y=x×(1+Ev)nY：扩增物数量；X：起始模板数量；Ev：扩增效率；n：扩增循环数第9页,共36页，星期六，2024年，5月PartIII普通PCR仪操作规程开机操作：打开PCR仪电源开关；向后平推PCR仪顶盖，放入PCR薄壁管。向前平推PCR仪顶盖，并均匀用力将反扣部分压下。注意：9700PCR仪必须使用圆头的PCR薄壁管。第10页,共36页，星期六，2024年，5月PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程GeneAmpPCRSystem9700Version3.05User:***RunCreatEditUtilUserF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStop第11页,共36页，星期六，2024年，5月PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程SelectUserNameprecqllyf……AcceptNewEditDeleteCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStop第12页,共36页，星期六，2024年，5月PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程UserName___UseENTERkeytoselectacharacter.AcceptBackspCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStopabcdefghijklmnopqrstuvwxyz第13页,共36页，星期六，2024年，5月PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程MethodsizelastusedExp000qin0903/01/06Exp001qin1904/10/06StartViewUserSortCancelF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStop第14页,共36页，星期六，2024年，5月PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程StartReturnF1F1F2F3F4F5147Enter2580369CEStop1Hld3Tmp35Cycles2Holds94.03:0094.00:2055.00:2072.00:2072.07:004.08第15页,共36页，星期六，2024年，5月PCR仪软件操作指南：PartIII普通PCR仪操作规程MethodsizelastusedExp000qin0903/01/06Exp001