DB22T 1619-2012 牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定液相色谱-质谱质谱法　　.docxVIP

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备案号：35747-2013DB22

吉林省地方标准

DB22/T1619—2011

牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

DeterminationofClenbuterolresidueinthecowurine——HPLC-MS/MSmethod

2012-12-01发布2013-01-01实施

吉林省质量技术监督局发布

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DB22/T1619—2012

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。

本标准主要起草人：马书民、张勋、赵庆松、杨璐、胡婷婷、康明芹、王明泰、荣会。

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DB22/T1619—2012

牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本标准规定了牛尿中盐酸克伦特罗残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于牛尿中盐酸克伦特罗残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

本方法采用高氯酸溶液沉淀蛋白，氢氧化钠溶液调节pH值后，用乙酸乙酯萃取，样液经浓缩后过混合型阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。

4试剂与材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1盐酸克伦特罗标准物质（CAS：37148-27-9）：纯度≥98.5%。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3乙酸乙酯：色谱纯。

4.4甲醇：色谱纯。

4.5甲酸：色谱纯。

4.6高氯酸：含量为70%～72%。

4.7氨水:含量为25%～28%。

4.8氢氧化钠。

4.90.1mol/L高氯酸溶液：0.83mL高氯酸溶解于100mL水中，混匀备用。

4.101mol/L氢氧化钠溶液：称取4gNaOH，溶于100mL水中，混匀备用。

4.110.1%甲酸溶液：准确吸取1mL甲酸（4.5），用水定容至1L，混匀后备用。

4.1250%甲醇溶液（50+50）：50mL甲醇（4.4）与50mL水混匀。

4.135%氨化甲醇（95+5）：95mL甲醇（4.4）与5mL氨水（4.7）混匀。

4.14标准储备溶液：准确称取适量的标准品，用甲醇(4.4)配制成100.0mg/L的标准贮备液，在0℃~4℃冰箱中保存。

4.15标准工作溶液：根据需要用甲醇(4.4)稀释配制适当浓度的标准工作液，现用现配。

4.16有机相微孔滤膜：0.22μm。

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DB22/T1619—2012

4.17混合型阳离子交换固相萃取柱（MCX固相萃取柱）：60mg/3mL。使用前依次用3mL甲醇、3mL水活化。

5仪器与设备

5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。

5.2氮吹仪。

5.3旋转蒸发器。

5.4天平：感量0.0001g和0.01g。

5.5涡旋混合器。

5.6离心机：转速大于7000r/min。

6分析步骤

6.1提取

取5mL样品（精确到0.1mL）于50mL离心管中，加入5mL高氯酸溶液（4.9）于涡旋混合器上充分混合，用1mol/LNaOH溶液调节溶液的pH值至9.5±0.1，加入20mL乙酸乙酯，涡旋振荡混匀。4℃条件下10000r/min离心5min，重复提取三次，合并乙酸乙酯相，放入浓缩瓶中，35℃旋至近干，用5mL0.1%甲酸溶液(4.11)定容，待净化。

6.2净化

将上述样液过MCX柱净化，依次用5mL甲醇（4.4）、5mL水和5mL0.1%甲酸水溶液(4.11)对柱子进行预处理，将样品溶解液以1.0mL/min的流速加载在MCX（4.17）小柱上，再依次用5mL0.1%甲酸溶液、5mL水、5mL50%甲醇