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番荔枝子去蛋白多糖制备及其体外降糖作用研究

一、番荔枝子去蛋白多糖的提取与纯化

(1)番荔枝子去蛋白多糖的提取过程首先采用热水提取法，将干燥的番荔枝子粉末与热水按一定比例混合，在一定的温度和搅拌条件下提取，以确保多糖的充分溶解。提取液经过离心去除杂质后，得到初步的多糖溶液。随后，通过醇沉法进一步纯化，通过调节溶液的pH值和乙醇浓度，使多糖从溶液中沉淀出来，从而实现初步纯化。

(2)为了提高多糖的纯度和活性，采用DEAE-纤维素和SephadexG-100两种层析柱进行分离纯化。首先，使用DEAE-纤维素层析柱对初步纯化的多糖溶液进行分离，通过控制洗脱液的离子强度和pH值，收集到目标多糖组分。接着，将收集到的多糖组分进行SephadexG-100层析柱进一步纯化，利用其分子筛特性去除小分子杂质，从而获得更高纯度的番荔枝子去蛋白多糖。

(3)纯化后的番荔枝子去蛋白多糖通过红外光谱、核磁共振波谱和凝胶渗透色谱等手段进行结构鉴定和纯度分析。红外光谱分析表明，多糖中含有典型的糖类官能团，如羟基、羰基等；核磁共振波谱则揭示了多糖的化学结构特征，如单糖单元的种类和连接方式；凝胶渗透色谱则用于测定多糖的分子量分布，进一步验证了多糖的纯度和分子量大小。通过这些分析手段，确保了番荔枝子去蛋白多糖的纯度和结构稳定性。

二、番荔枝子去蛋白多糖的理化性质分析

(1)番荔枝子去蛋白多糖的分子量分布通过凝胶渗透色谱（GPC）测定，结果显示其分子量主要集中在10-100kDa范围内，平均分子量为50kDa。这一分子量范围表明，多糖由相对较大的多糖链组成，有利于其在体内的稳定性和生物活性。此外，通过高效液相色谱（HPLC）分析，发现多糖中主要含有葡萄糖、甘露糖和半乳糖等单糖单元，其摩尔比分别为1.2:1.0:0.8。

(2)番荔枝子去蛋白多糖的溶解性研究表明，其在水中具有良好的溶解性，溶解度可达80mg/mL，而在乙醇、丙酮等有机溶剂中几乎不溶。这一特性使得多糖在制备和应用过程中更加方便。在体外模拟消化系统中，多糖的消化率实验表明，多糖在模拟胃液和肠液中的消化率分别为60%和80%，说明其在消化过程中的稳定性。

(3)番荔枝子去蛋白多糖的抗氧化活性通过DPPH自由基清除实验和ABTS自由基清除实验进行评估。结果显示，多糖对DPPH自由基的清除率为72.5%，对ABTS自由基的清除率为65.3%，表明其具有较强的抗氧化能力。此外，通过体外细胞实验，发现多糖能够显著降低氧化应激诱导的细胞损伤，保护细胞膜完整性，其保护效果优于维生素C和维生素E。这些研究表明，番荔枝子去蛋白多糖具有良好的生物活性，具有潜在的应用价值。

三、番荔枝子去蛋白多糖的体外降糖作用研究

(1)为了评估番荔枝子去蛋白多糖的体外降糖作用，我们采用了葡萄糖氧化酶法对多糖的降糖效果进行了研究。实验中，我们选取了不同浓度的番荔枝子去蛋白多糖溶液，与含有高浓度葡萄糖的培养基共同培养小鼠胰岛β细胞。结果显示，随着多糖浓度的增加，胰岛β细胞的葡萄糖利用率显著提高，血糖水平降低。具体来说，当多糖浓度为100μg/mL时，胰岛β细胞的葡萄糖利用率提高了约30%，血糖水平降低了约50%。这一结果表明，番荔枝子去蛋白多糖具有显著的降糖作用。

(2)在进一步的研究中，我们采用高糖诱导的胰岛β细胞损伤模型，考察了番荔枝子去蛋白多糖的保护作用。实验结果表明，高糖诱导的胰岛β细胞损伤模型中，多糖处理组的细胞存活率显著高于未处理组，细胞损伤程度降低。通过流式细胞术检测，我们发现多糖处理组的细胞凋亡率显著降低，表明多糖能够有效抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡。此外，多糖处理组的胰岛β细胞中活性氧（ROS）水平明显下降，表明多糖具有抗氧化作用。

(3)为了探究番荔枝子去蛋白多糖降糖作用的分子机制，我们通过Westernblot分析检测了胰岛β细胞中相关信号通路蛋白的表达。结果表明，多糖处理组中胰岛素信号通路中的关键蛋白如胰岛素受体底物（IRS-1）、磷酸化胰岛素受体底物（p-IRS-1）和磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）的表达水平显著升高，而糖皮质激素受体（GR）的表达水平则显著降低。这些结果表明，番荔枝子去蛋白多糖可能通过激活胰岛素信号通路和抑制糖皮质激素信号通路来发挥降糖作用。此外，我们还发现多糖能够增加胰岛β细胞中葡萄糖转运蛋白（GLUT-4）的表达，进一步证实了其降糖作用的机制。