DB21T 2251-2014 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法　.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB21

辽宁省地方标准

21/T22512014

DB—

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法

MethodofRT-PCRforthedetectionofporcineepidemicdiarrheavirus

2014-3-07发布2014-05-07实施

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辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2251—2014

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。

本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。

本标准起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。

本标准主要起草人：于学武顾贵波陈瑶赵晓彤赵凤菊刘坤洋关乃鹏王珊珊刁贺军

王冰邓文超

I

DB21/T2251—2014

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）RT-PCR检测方法的仪器

和器材、试剂和材料、操作步骤和结果判定，并介绍了其原理。

本标准适用于猪流行性腹泻的诊断和监测，适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中PEDV核酸

的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

中华人民共和国农业部公告第302号兽医实验室生物安全技术管理规范

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

PEDV：猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus）

DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）

BP：碱基对（basepair）

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscriptionpolymerasechainreaction）

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）

4原理

PEDV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据PEDV保守基因

序列设计一对引物，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以引物为延伸起点，通过变性、退火

和延伸，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。

5仪器和器材

本技术规范中需使用的主要仪器和器材有高速台式冷冻离心机（最大离心力12000g以上）、冰箱

（2~8℃,-20℃和-70℃三种）、PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像系统、微波炉、分析天平、1.5mL离心

管、0.2mL离心管、微量移液器和吸头。

6试剂和材料

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