DB21T 3278-2020 饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测　.docxVIP

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备案号：73359-2020DB21

辽宁省地方标准

DB21/T3278—2020

饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测

MethodfordeterminationofBacilluscoagulansinfeeds

2020-07-30发布2020-08-30实施

辽宁省市场监督管理局发布

DB21/T3278—2020

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3培养基和材料 1

4主要仪器设备和玻璃器皿 1

5检验程序 2

6采样 3

7试样的制备 3

8试验步骤 3

9结果与报告 5

附录A（规范性附录）培养基和试剂 7

DB21/T3278—2020

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则编写。本标准由辽宁省农业农村厅提出并归口管理。

本标准起草单位：大连三仪动物药品有限公司、江苏三仪生物工程有限公司、大连工业大学、开原市检验检测认证服务中心。

本标准主要起草人：江国托、刘艳、单春乔、李娟、林洋、王效禹、刘秋晨、马大川、钱方、牟光庆、刘恩、翟宏旭、曹艳子、顾艳丽、张英雪、杨乔乔、李晶晶、陆继爽、刘星、冷寒冰、曾楠。

本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024标准起草单位通讯地址：辽宁省大连市甘井子区营城子镇营旭路9号，联系电话：0411DB21/T3278—2020

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饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测

1范围

本标准规定了饲用微生物制剂中凝结芽孢杆菌的检测方法。

本标准适用于含有益微生物凝结芽孢杆菌的各种饲料添加剂中凝结芽孢杆菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008/ISO3696：1987，MOD）

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定

GB/T14699.1饲料采样（GB/T14699.1-2005/ISO6497：2002，IDT）

GB/T20195动物饲料试样的制备（GB/T20195-2006/ISO6498：1998，IDT）

3培养基和材料

实验用水参照标准：分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008/ISO3696：1987，MOD）

3.10.85%灭菌生理盐水

3.2自制改良营养琼脂培养基(NA)：参见附录A中的A.1

3.3革兰氏染色液：参见附录A中的A.2

3.4细菌生化鉴定试剂盒

3.5细菌基因组DNA提取试剂盒

3.6标准菌株：凝结芽孢杆菌CICC21736

4主要仪器设备和玻璃器皿

4.1恒温培养箱：50℃±1℃

4.2恒温水浴锅：80℃±1℃

4.3普通冰箱

4.4天平：感量为0.1g、0.01g、0.0001g

4.5振荡器或漩涡混合器

4.6显微镜：1000倍

DB21/T3278—2020

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4.7pH计：精确度0.1

4.8无菌玻璃或塑料培养皿Φ=90mm、无菌锥型瓶、无菌玻璃或塑料涂布棒

4.9量筒：250mL

4.10PCR仪

4.11电泳仪

4.12凝胶成像仪

4.13移液器：量程10μL、100μL、1000μL、10000μL

5检验程序

凝结芽孢杆菌检验程序见下图。

DB21/T3278—2020

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6采样

采集样品真实，具有代表性。采样工具，如铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子等，应为无菌器皿。样品采集后置于4℃~8℃环境内保存，并应及时送到微生物检验室进行检测。采样数量和方式按GB/T14699.1执行。

7试样的制备

按照GB/T20195进行试样的制备，样品制备后应及时检验。

8试验步骤

8.1检样制备、初