有效成分的分离与精制二24课件讲解.pptx

1有效成分的分离与精制二

2㈡根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离1、液-液萃取法2、逆流连续萃取法3、逆流分配法（CounterCurrentDistribution，CCD）4、液滴逆流色谱法（DCCC）5、高速逆流色谱法（HSCCC）6、气液分配色谱（GC或GLC）7、液-液分配色谱（LC或LLC）

31、液-液萃取法利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分的分配系数相差越大，分离效率越高。水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取；有效成分是偏于亲水性的物质，需用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、丁醇等。提取黄酮类成分多用乙酸乙脂和水的两相萃取。提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。

4液-液萃取法操作注意事项⑴先用小试管猛烈振摇约1分钟，观察萃取后二液层分层现象。如果容易产生乳化，大量提取时要避免猛烈振摇，可延长萃取时间。如碰到乳化现象，可将乳化层分出，再用新溶剂萃取；或将乳化层抽滤，或将乳化层稍稍加热；或较长时间放置并不时旋转，令其自然分层。乳化现象较严重时，可以采用二相溶剂逆流连续萃取装置。⑵水提取液的浓度最好在比重1.1～1.2之间，过稀则溶剂用量太大，影响操作。

52、高速逆流色谱

(High-speedCountercurrentChromatography，HSCCC)大多数色谱法都需要有固相载体某种形式的选择性吸附作用。在应用固相载体色谱分离中，往往会存在不同程度的不可逆吸附，造成被分离样品的损失，尤其在分离微量样品时受到限制。高速逆流色谱，是近十年迅速发展起来的新型液—液分配色谱技术。与其它液相色谱分离方法相比．它不使用固相载体作固定相，被分离物质在互不相溶两相分配分离，克服了固相载体带来的样品吸附、损失、污染、峰形拖尾等缺点。且花费溶剂少，分辨率高，可进行纯品制备。利用HSCCC，中草药粗提物的分离纯化制备可同步完成，被分离物可定量回收。

6⑴HSCCC的工作原理两种互不相溶的溶剂在聚四氟乙烯管内作高速行星运转，其中一相溶剂作固定相，用恒流泵输送载有样品的另一相溶剂穿过固定相，两相溶剂在螺旋管中实现高效的接触、混合、分配和传递。由于样品中各组分在两相中的分配能力不同，导致在聚四氟乙烯管中移动的速度也不同，从而使样品中各组分得到分离。

7⑵HSCCC的特点1、应用范围广，适应性好由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多，因而HSCCC适用于任何极性范围的品的分离，特别适用于分离极性大的组分以及一些生物大分子。2、操作简便，容易掌握对样品的预处理要求低，一般的粗提物即可进行HSCCC的制备分离或分析。

8⑵HSCCC的特点3、回收率高固定相为液体，无需固体作载体，克服气、液相色谱使用固相载体带来的样品吸附、损失、污染、峰形拖尾等缺点。4、重现性好分离过程稳定、峰的保留相对标准偏差小于2％，

9⑵HSCCC的特点5、分离效率高，分离量较大与一般色谱的分离方式不同，能实现梯度操作和反相操作、亦能进行重复进样，特别适用于制备性分离，产品纯度高，制备量大，溶剂消耗少。较大的制备型HSCCC，柱容积可达530ml，一次最多进样可达20g粗品；较小的分析型的HSCCC柱容积为8mL，进样量为几十微克，最大转速可达4000r／min.因此，被广泛地应用于植物化学成分的分离制备研究。

10⑵HSCCC的特点根据以上特点，HSCCC适合于中药成分的分离和分析。目前高速逆流色谱仪已成功地开发出分析型和制备型两大系列。制备或半制备HSCCC的特点是高流速、高浓度，不但适用于非极性化合物的分离，也适用于极性化合物的分离。在制备分离方面，可用于中药粗提物中各组分的分离，也可进一步精制，甚至直接从从粗提物—步纯化到纯品，来制备中药化学成分标准品。

11⑵HSCCC的应用HSCCC的分离效率与气相色谱和高效液相色谱等技术相比较，前者不适宜用它完成组成复杂的混合物的全谱分离分析。而其对于样品的预处理条件较放松及回收率高，制备量大，特别适用于特定部位和特定组分的分离纯化与制备。

12⑶HSCCC的应用制备中药化学对照品中草药化学对照品应具有高度均匀性，量值准确性和良好稳定性，其纯度要求很高。制备型HPLC曾是国外常用的主要手段。但是其设备和载体填料价格很高．对样品前期处理要求严格，存在不可逆吸附，溶剂用量大的缺点。因此致力于HSCCC分离、统化、制备中草药有效成分对照品的研究和产业化，具有现实意义。从银杏叶中制备异鼠李素、山奈酚、槲皮索、白果内酯和橙皮甙；从大黄制备大黄羟基蒽醌甙元；从洋地黄叶中制备洋地黄毒甙；从虎杖中分离提纯白藜芦醇和白藜芦醇甙等。