DB21T 3257-2020 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体酶联免疫检测方法　.docxVIP

ICS11.220B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T3257—2020

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体酶联免疫检测方法

MethodofELISAforPRRSVantibodyNEQ

2020-04-30发布2020-05-30实施

辽宁省市场监督管理局发布

DB21/T3257—2020

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3缩略语 1

4原理 1

5仪器和器材 1

6试剂 2

7操作步骤 2

8试验成立条件与结果判定 3

9检测过程中防止交叉污染的措施 3

10废弃物处理 3

附录A（资料性附录）试剂配制 4

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II

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由动物卫生标准化技术委员会（辽宁）提出，辽宁省农业农村厅归口管理。本标准起草单位：辽宁省农业发展服务中心。

本标准协助单位：洛阳现代生物技术研究院有限公司、辽宁佰瑞生物科技有限公司。

本标准主要起草人：周晨阳、魏澍、高志峰、魏园园、王冰、董娜、刘金玲、刘耀川、杨作丰、高原、王连山、马亮亮、潘婷婷、杨嵘长、姜斌、杨太东、于春玲。

本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024

标准起草单位通讯地址：辽宁省动物及产品检疫中心（沈阳市沈河区万柳塘路105号甲），联系电话：024

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猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体酶联免疫检测方法

1范围

本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体酶联免疫检测方法的技术要求。

本标准适用于在生物安全Ⅱ级（BSL-2）以上的实验室进行猪繁殖与呼吸综合征病毒病的诊断、监测及流行病学调查，适用于猪血清或血浆样品中的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T19495.2-2004转基因产品检测实验室技术要求

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

ELISA：酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay）

PRRSV：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus）PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatebuffersolution）

OD：光密度，表示被检测物吸收掉的光密度（opticaldensity）

4原理

本方法原理是包被板上包被的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗原，可与待测样品中的特异性抗体反应，形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的二抗，则形成免疫复合物，洗涤后，如待测样品中含有PRRSV抗体，显色深，为阳性，反之为阴性。

5仪器和器材

5.1微量可调移液器：50μL～200μL。

5.25mL采血针管

5.3冰箱：4℃±1℃冰箱，-20℃±1℃冰箱。

5.4酶标仪

5.537℃恒温培养箱

5.6高速台式离心机（离心范围0～20000r/min）

5.7洗板机

5.8离心管：4mL离心管、2mL离心管和1.5mL离心管。

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6试剂

注：本技术规范中使用的试剂，除另有说明外，所有实验使用的试剂等级均为分析纯或生化试剂；所有试剂均用无菌的容器分装。

6.1猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原包被板。

6.2阳性对照：猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性猪血清。

6.3阴性对照：无猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体猪血清。

6.4酶标复合物：过氧化物酶标记的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体。

6.5PBS：磷酸盐缓冲液（0.01mol/LpH7.4）配制见第A.1章。

6.6洗涤液：配制见第A.2章。

6.7样品稀释液：配制见第A.3章。

6.8底物