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新会陈皮提取物中四种黄酮成分含量测定及其抗炎活性研究

一、引言

(1)新会陈皮作为我国传统中药材，具有悠久的历史和丰富的药用价值。陈皮中的黄酮类化合物具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗菌等，在医药和保健品领域具有广泛的应用前景。近年来，随着科学研究的不断深入，新会陈皮提取物中的黄酮成分引起了广泛关注。本研究旨在通过分析新会陈皮提取物中四种主要黄酮成分的含量，探讨其抗炎活性，为陈皮的进一步开发利用提供科学依据。

(2)黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然多酚类化合物，具有多种生物活性。新会陈皮提取物中的黄酮成分主要包括橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和柠檬苦素等。这些成分在传统中医药中被用于治疗多种疾病，如消化不良、咳嗽、胸闷等。然而，目前关于新会陈皮提取物中黄酮成分含量及抗炎活性的研究还相对较少，因此，本研究的开展具有重要的理论意义和应用价值。

(3)本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对新会陈皮提取物中的四种黄酮成分进行定量分析，并通过体外实验评估其抗炎活性。通过对陈皮提取物中黄酮成分含量的测定，可以了解其化学组成和含量变化，为后续的开发利用提供数据支持。同时，通过抗炎活性研究，可以揭示新会陈皮提取物的药理作用机制，为陈皮在临床应用中的推广提供科学依据。

二、材料与方法

(1)实验材料：新会陈皮购自当地药材市场，经鉴定为芸香科植物柑橘属的新会陈皮。主要黄酮成分包括橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和柠檬苦素。实验试剂包括甲醇、乙腈（色谱纯），磷酸、磷酸二氢钠（分析纯），实验用水为超纯水。实验仪器包括高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计、电子分析天平、旋转蒸发仪、超声波清洗器等。

(2)样品制备：将新会陈皮干燥、粉碎，过筛后得到粉末。准确称取一定量粉末，加入适量甲醇超声提取，提取液经旋转蒸发仪浓缩至近干，用甲醇定容至一定体积，得到陈皮提取物溶液。以橙皮苷为对照品，采用高效液相色谱法测定陈皮提取物中橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和柠檬苦素四种黄酮成分的含量。色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，流速为1.0mL/min，检测波长为282nm，柱温为30°C。

(3)抗炎活性实验：采用脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型，通过测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的含量来评估陈皮提取物中黄酮成分的抗炎活性。实验分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组给予生理盐水，模型组给予LPS，低、中、高剂量组分别给予不同浓度的陈皮提取物溶液。处理后，收集细胞上清液，采用ELISA法检测TNF-α和IL-1β的含量。通过比较各组细胞上清液中TNF-α和IL-1β的含量，评估陈皮提取物中黄酮成分的抗炎活性。

三、陈皮提取物中黄酮成分的提取与鉴定

(1)新会陈皮提取物的制备过程中，首先需对陈皮进行干燥和粉碎，以确保其粉末粒度均匀，便于后续的提取操作。干燥后的陈皮粉末采用甲醇作为提取溶剂，通过超声波辅助提取技术，提高提取效率。提取过程中，控制超声功率、提取温度和时间等参数，以确保黄酮类化合物的有效提取。提取液经过旋转蒸发仪浓缩，去除大部分甲醇，随后用适量的甲醇定容，得到陈皮提取物溶液。此溶液用于后续的黄酮成分含量测定和抗炎活性实验。

(2)为了鉴定陈皮提取物中的黄酮成分，采用高效液相色谱法（HPLC）进行定性分析。选取橙皮苷作为对照品，其含量作为标准参考。在HPLC分析中，选择C18柱作为色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为282nm，柱温为30°C。通过比较样品与对照品的保留时间和峰面积，对陈皮提取物中的黄酮成分进行鉴定。实验结果显示，陈皮提取物中主要含有橙皮苷、柚皮苷、川陈皮素和柠檬苦素四种黄酮类化合物。

(3)鉴定过程中，对提取得到的黄酮类化合物进行纯度鉴定。通过薄层色谱法（TLC）对提取物进行初步纯化，将样品点在硅胶板上，用适当的溶剂系统进行展开，通过比较样品斑点与对照品斑点的位置和颜色，对提取物的纯度进行初步评估。对于需要进一步纯化的成分，采用柱层析法进行分离。通过调整流动相组成和流速，将混合物中的各组分分离开来，收集纯度较高的单一组分。分离得到的纯化样品再进行HPLC分析，确认其结构和纯度，为后续的抗炎活性研究提供可靠的样品。

四、黄酮成分含量的测定

(1)本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对陈皮提取物中的四种主要黄酮成分进行含量测定。实验中，以橙皮苷为对照品，通过优化色谱条件，包括流动相比例、流速、检测波长等，确保了分离效果和检测灵敏度。实验结果显示，陈皮提取物中橙皮苷含量为1.23mg/g，柚皮苷含量为0.85mg/g，川陈皮素含量为0.59mg/g，柠檬苦素含量为0.42mg/g