DB21T 2209-2013 海绵种属分子生物学鉴定技术规程.pdfVIP

ICS65.150

B51

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T2209—2013

海绵种属分子生物学鉴定技术规程

TechnicalSpecificationofIdentifyingSpongethroughMolecularBiology

Techniques

2013-12-12发布2014-01-22实施

辽宁省质量技术监督局发布

DB21/T2209—2013

前言

本标准是按照GB/T1.1—2009给出的规则起草的。

本标准由大连海洋大学提出。

本标准由大连市质量技术监督局归口。

本标准主要起草单位：大连海洋大学、中国科学院大连化学物理研究所

本标准主要起草人：付晚涛、郑长波、曹旭鹏、苏延明、宋悦凡、潘勍宇、安宗福。

本标准于2013年**月**日首次发布。

I

DB21/T2209—2013

海绵种属分子生物学鉴定技术规程

1范围

本标准规定了海绵种属分子生物学鉴定的总则、海绵样品采集与保存、海绵种属鉴定方法。

本标准适用于海绵的样品采集、保存、处理和种属分子生物学鉴定方法。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

海绵

海绵（Sponge）是最低等多细胞动物（Metazoan），在动物界中单独构成多孔动物门（PhylumPorifera）。

2.2

海绵分子条码

海绵的细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（cytochromeoxidasesubunitⅠ,简称COI）的DNA序列为海绵的保

守基因序列信息，作为海绵分子条码。

3总则

3.1原理

海绵细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（COI）的DNA序列为海绵的保守基因序列，作为海绵分子条码，用

于鉴定海绵种属。通过分子生物学技术——聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，简称PCR）

扩增海绵的COI基因部分序列，测序后与已经鉴定海绵的COI基因序列比对，以此鉴定海绵的种属。

3.2仪器与设备

——野外生物样品保存箱或泡沫保温箱；

——高速低温冷冻离心机；

——普通PCR仪；

——水浴锅；

——-80℃冰柜。

3.3试剂与材料

——无水乙醇（分析纯）；

——液氮；

——细胞裂解缓冲液（10mmol/LTris-Cl，pH8.0；1mmol/LEDTA，pH8.0；0.1%(m/V)SDS）；

——异丙醇（分析纯）；

1

DB21/T2209—2013

——醋酸甲溶液（60ml5mol/L醋酸钾；11.5ml冰醋酸；28.5ml超纯水）；

——细胞裂解液（20mmol/LTris-Cl，pH7.6）；

——蛋白酶K（20mg/ml）；

——TE缓冲液（pH7.6）（100mol/LTris-Cl，pH7.6；10mmol/LEDTA，pH8.0）；

——超纯水；

——PCR酶(5