DB21T 3253-2020 小反刍兽疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法.docxVIP

ICS11.220B41

DB21

辽宁省地方标准

DB21/T3253—2020

小反刍兽疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法

Developmentthemethodofreal-timefluorescentRT-PCRfordetectionofPPRV

2020-04-30发布2020-05-30实施

辽宁省市场监督管理局发布

DB21/T3253—2020

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3缩略语 1

4原理 1

5仪器和器材 1

6试剂和引物 2

7操作步骤 2

8试验成立条件与结果判定 4

9检测过程中防治交叉污染的措施 4

10废弃物处理 5

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II

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由动物卫生标准化技术委员会（辽宁）提出。本标准由辽宁省农业农村厅归口。

本标准起草单位：辽宁省农业发展服务中心、洛阳莱普生信息科技有限公司、辽宁佰瑞生物科技有限公司。

本标准主要起草人：邓文超、石霖、魏园园、吴继阳、张皓淳、王冰、张鑫、王竹、刘金玲、董娜、高原、杨作丰、彭潇潇、姚伟、里里、陈腾、胡影。

本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。

归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024

标准起草单位通讯地址：辽宁省动物及产品检疫中心（沈阳市沈河区万柳塘路105号甲），联系电话：024

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1

小反刍兽疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了小反刍兽疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于在生物安全Ⅱ级（BSL-2）以上的实验室进行小反刍兽疫病毒病的诊断、监测及流行病学调查，适用于反刍动物血液血清、淋巴结及口鼻棉拭子中小反刍兽疫病毒核酸的RT-PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T19495.2-2004转基因产品检测实验室技术要求

中华人民共和国农业部公告第302号（《兽医实验室生物安全技术管理规范》）

农业部关于印发《病死及病害动物无害化处理技术规范》的通知（农医发[2017]25号）

3缩略语

下列缩略语适用于本标准。

PPRV：小反刍兽疫病毒（PestedesPetitsRuminantsvirus）

RNA：核糖核酸（ribonucleicacid）RNase：核糖核酸酶（ribonuclease）

DEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonate）bp：碱基对（basepair）

RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscriptionpolymerasechainreaction）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）PBS：磷酸盐缓冲液（phosphatebuffersolution）

TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸电泳缓冲液（Trisacetate-EDTAbuffer）

4原理

本方法针对小反刍兽疫病毒高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含小反刍兽疫病毒基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

5仪器和器材

5.1台式冷冻离心机（离心范围0～20000r/min）

5.2冰箱：4℃±1℃,-20℃±1℃,-80℃±1℃

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2

5.3全自动荧光定量PCR仪（ABI7000、ABI7300、ABI7500、ABI7900、BIO-RadCFX384Touch、BIO-RadCFX96Touch等）

5.4离心管：15mL、1.5mL和0.2mL。

5.5微量可调移液器：100～1000μL，