栀子果实中环烯醚萜苷和藏红花素的分离富集方法[发明专利].docxVIP

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栀子果实中环烯醚萜苷和藏红花素的分离富集方法[发明专利]

一、实验材料与仪器设备

(1)实验材料：栀子果实采自我国南方栀子种植基地，选取成熟、无病虫害的果实，洗净晾干后粉碎成粉末。实验过程中所用的化学试剂均为分析纯，包括甲醇、乙腈、乙酸乙酯、正己烷、氨水、磷酸二氢钠等。此外，实验还使用了硅胶、氧化铝、大孔树脂等分离纯化材料。

(2)仪器设备：实验过程中所使用的仪器包括高效液相色谱仪（HPLC）、紫外-可见分光光度计、旋转蒸发仪、超声波清洗器、分析天平、磁力搅拌器、高速离心机、恒温水浴锅、层析柱等。高效液相色谱仪配置有紫外检测器，用于检测环烯醚萜苷和藏红花素。紫外-可见分光光度计用于测定样品的吸光度值。旋转蒸发仪用于浓缩提取液。超声波清洗器用于清洗实验器皿。分析天平用于称量样品和试剂。磁力搅拌器用于混合溶液。高速离心机用于分离样品中的固体和液体。恒温水浴锅用于控制反应温度。层析柱用于样品的分离纯化。

(3)实验用水：实验用水为超纯水，电阻率大于18.2MΩ·cm，通过Milli-Q超纯水系统制备。超纯水系统定期进行清洗和消毒，确保实验用水质量符合要求。实验过程中，所有用水均需经过过滤，以去除可能存在的杂质。

二、栀子果实中环烯醚萜苷和藏红花素的提取方法

(1)栀子果实粉末用甲醇超声提取，提取时间为30分钟，温度控制在60℃。提取液经旋转蒸发仪浓缩至近干，然后用正己烷萃取3次，每次萃取时间为15分钟。萃取后的正己烷层经无水硫酸钠干燥，过滤后得藏红花素提取物。

(2)正己烷萃取后的水层用氨水调节pH至8.0，加入氧化铝，搅拌吸附30分钟。吸附后的氧化铝用甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用甲醇溶解，得环烯醚萜苷提取物。

(3)藏红花素提取物和环烯醚萜苷提取物分别通过大孔树脂进行纯化，洗脱剂为不同浓度的甲醇溶液。收集特定浓度的甲醇溶液，浓缩后得最终产品。藏红花素提取物经HPLC检测，藏红花素含量达到90%以上；环烯醚萜苷提取物经HPLC检测，环烯醚萜苷含量达到85%以上。

三、分离富集方法

(1)首先采用高效液相色谱（HPLC）法对栀子果实中提取的环烯醚萜苷和藏红花素进行初步分离。使用C18反相色谱柱，流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱，流速为1.0mL/min。检测波长为254nm，柱温设定为30℃。分离后，对目标化合物进行鉴定。

(2)对分离出的环烯醚萜苷和藏红花素进行富集处理。采用大孔树脂柱层析法，以不同浓度的甲醇溶液为洗脱剂，对目标化合物进行富集。首先用甲醇对树脂进行预处理，然后将分离得到的混合物上柱，收集特定浓度的甲醇洗脱液。通过这种方式，可以显著提高目标化合物的纯度。

(3)最后，对富集后的目标化合物进行纯化。采用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）技术，对富集后的样品进行检测和鉴定。通过比较保留时间和质谱数据，可以进一步确认化合物的结构和纯度。最终，通过多次重复实验，得到高纯度的环烯醚萜苷和藏红花素。