普通免疫学抗体.ppt

免疫球蛋白基因免疫球蛋白基因结构1、重链的基因结构Ig重链基因:V、D、J和C四种不同基因片段V－variablesegment，J－jioningsegmentC－constantsegment，D－diversitysegmentH链可变区基因:VH、JH、DH3个基因区段小鼠：300～1000个VH；20个DH；4个JH人：75～300个VH；30个DH；6个JH第87页,共130页，星期六，2024年，5月VH基因片段：编码V区第1~94位AaJH基因片段：编码第98~113位AaDH基因片段：95~97位3~7个Aa，位于CDR3区(互补决定区)，与Ab的多样性有关。第88页,共130页，星期六，2024年，5月轻链的基因结构(κ和λ链)κ链的基因结构Vκ、Jκ、Cκ3类基因片段组成。小鼠：约250个Vκ、5个Jκ(4个有功能)、1个Cκ人:Vκ(约100个)、Jκ(5个)、Cκ(1个)小鼠:V区基因上游均有一个L(Leader)基因(编码信号肽，是Ig分泌所必须的)其编码22个氨基酸的κ链先导序列即信号肽，肽链通过内质网向外运输。第89页,共130页，星期六，2024年，5月Vκgenes：V区约96个氨基酸Jκgenes：在Vgenes下游，相距约23kb，5个基因，Jκ3为无效基因。编码13个氨基酸的肽段，属于V区片段，又称连接片段。Cκgenes：J区下游，相距约2.5Kb,编码C区肽段第90页,共130页，星期六，2024年，5月λ链的基因结构Vλ、Jλ、Cλ(Jλ-Cλ)每个Vgene上游也有Lgene小鼠：3个Vλ、4个Jλ、4Cλ(1个Jλ假基因)人:约31个有功能Vλ、4个Jλ、7个Cλ(manypseudogenes)JλCλ成簇(cu)排列第91页,共130页，星期六，2024年，5月Lgene:N端15~22个Aa的先导序列Vλgenes：第1~99位AaJλgenes：V区98~110位AaCλgenes：全部C区，即111~214位Aa第92页,共130页，星期六，2024年，5月第93页,共130页，星期六，2024年，5月第94页,共130页，星期六，2024年，5月VHDJ////300134CHMouseantibodygenes免疫球蛋白基因的重排V－variablesegmentJ－jioningsegmentC－constantsegmentD－diversitysegment第95页,共130页，星期六，2024年，5月利根川进,1987年，Nobel奖第96页,共130页，星期六，2024年，5月纯化了抗体的mRNA，然后将其与DNA杂交并进行观察，这个实验可有效计算抗体的基因数目，结果表明远远少于抗体数目.第97页,共130页，星期六，2024年，5月Southern分子杂交技术尚未发明，因此DNA杂交实验是一件非常繁重的工作。首先需要用限制性内切酶对基因组DNA进行消化，然后利用大规模凝胶琼脂糖电泳进行分离，将包含特定条带的凝胶进行回收并在液相反应体系中进行DNA杂交。由于切口平移（Nick-translation）和cDNA克隆技术均尚未发明，因此杂交探针使用的抗体轻链mRNA不得不首先从细胞中纯化，然后用放射性碘元素标计.第98页,共130页，星期六，2024年，5月1976,比较胚胎细胞(不产生抗体)和骨髓瘤细胞(产生抗体)中抗体轻链基因的分布情况时发现在胚胎期不同抗体基因的距离较远，而在骨髓瘤细胞中这些基因距离靠近，说明生殖细胞在发育成B淋巴细胞的过程中,抗体基因发生了重排现象.第99页,共130页，星期六，2024年，5月利根川进抗体多样性遗传机理的阐明,预示着进入了分子免疫学时期,对免疫学的这项发现还改变了人们对基因的传统看法，即一个基因编码一种蛋白，发育和细胞分化过程中不发生变化。第100页,共130页，星期六，2024年，5月“不敢冒险的人，或者只会考试得分的人，是不适合科学研究的。”“科学家的最重要的才能是要有怀疑的能力，还要有