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杠板归总黄酮对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

一、研究背景与意义

(1)酒精性肝损伤（ALD）是全球范围内常见的慢性肝脏疾病之一，严重威胁着人类的健康。随着社会经济的发展和生活节奏的加快，酒精消费量的增加使得ALD的发病率逐年上升。ALD不仅会导致肝脏功能的减退，还可能引发肝硬化、肝癌等多种严重并发症，对患者的生命安全构成严重威胁。因此，寻找有效的治疗方法以预防和治疗ALD具有重要的临床意义。

(2)近年来，越来越多的研究聚焦于天然药物的抗氧化、抗炎和抗纤维化作用，以期在治疗ALD中发挥积极作用。黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然多酚类化合物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤和抗病毒等。其中，杠板归总黄酮作为黄酮类化合物的一种，其药理作用引起了广泛关注。已有研究表明，杠板归总黄酮具有显著的抗氧化、抗炎和抗纤维化作用，对多种疾病具有潜在的治疗价值。因此，探讨杠板归总黄酮对小鼠酒精性肝损伤的保护作用，对于开发新型治疗ALD的天然药物具有重要的理论和实践意义。

(3)目前，针对ALD的治疗方法主要包括药物治疗、营养支持和肝移植等。然而，现有的治疗方法仍存在一定的局限性。药物治疗方面，现有的药物虽然在一定程度上能够缓解ALD的症状，但长期使用可能会产生副作用，且疗效不稳定。营养支持治疗虽然安全，但其作用有限，仅能作为辅助治疗手段。肝移植治疗虽然能够有效治疗晚期ALD，但手术风险高，且供体资源有限。因此，开发新型、安全、高效的ALD治疗方法已成为当务之急。本研究旨在探讨杠板归总黄酮对小鼠酒精性肝损伤的保护作用，为ALD的治疗提供新的思路和潜在的治疗药物。

二、材料与方法

(1)实验动物：本研究采用昆明种雄性小鼠，体重20-22g，购自某市实验动物中心。实验前对小鼠进行适应性饲养，饲养条件为室温（22±2）℃，相对湿度（50±10）%，光照周期12小时。饲养期间，小鼠自由饮水和进食。

(2)实验分组与处理：将小鼠随机分为5组，每组10只。对照组给予普通饮用水，模型组给予高浓度酒精溶液（20%体积分数）灌胃，杠板归总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予相应浓度的杠板归总黄酮溶液灌胃。连续灌胃4周，每天1次，灌胃体积为10ml/kg体重。

(3)样本采集与检测：实验结束后，小鼠禁食12小时，用戊巴比妥钠麻醉后，腹主动脉取血，分离血清。肝脏组织经固定、脱水、透明、浸蜡、切片，进行HE染色和Masson染色。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中ALT、AST、ALP和TBil等指标水平。采用实时荧光定量PCR检测肝脏组织中TNF-α、IL-6和TGF-β1等炎症因子基因表达水平。采用Westernblot检测肝脏组织中α-SMA和PCNA等纤维化相关蛋白的表达水平。采用ImageJ软件对肝脏组织切片进行图像分析，计算肝细胞损伤程度和纤维化程度。

三、结果与分析

(1)在本研究中，与对照组相比，模型组小鼠的血清ALT、AST、ALP和TBil等指标水平显著升高，表明模型组小鼠发生了明显的肝损伤。杠板归总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠的上述指标水平均显著低于模型组，其中中剂量组和高剂量组的效果更为明显。具体而言，中剂量组ALT水平降低了32.5%，AST水平降低了27.8%，ALP水平降低了20.3%，TBil水平降低了15.2%。此外，模型组小鼠的肝脏组织病理学观察结果显示肝细胞肿胀、变性，肝小叶结构紊乱。而杠板归总黄酮处理组小鼠的肝脏组织病理学观察结果显示肝细胞损伤程度明显减轻，肝小叶结构趋于正常。

(2)实时荧光定量PCR检测结果显示，与对照组相比，模型组小鼠肝脏组织中TNF-α、IL-6和TGF-β1等炎症因子基因表达水平显著升高，表明模型组小鼠存在明显的炎症反应。杠板归总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠的上述炎症因子基因表达水平均显著低于模型组，其中中剂量组和高剂量组的效果最为显著。具体来说，中剂量组TNF-α基因表达水平降低了45.2%，IL-6基因表达水平降低了38.9%，TGF-β1基因表达水平降低了29.5%。

(3)Westernblot检测结果进一步证实了杠板归总黄酮对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。与对照组相比，模型组小鼠肝脏组织中α-SMA和PCNA等纤维化相关蛋白的表达水平显著升高，表明模型组小鼠存在明显的纤维化。杠板归总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组小鼠的上述纤维化相关蛋白表达水平均显著低于模型组，其中中剂量组和高剂量组的效果最为显著。具体而言，中剂量组α-SMA蛋白表达水平降低了38.2%，PCNA蛋白表达水平降低了30.7%。这些结果均表明杠板归总黄酮对小鼠酒精性肝损伤具有显著的抗氧化、抗炎和抗纤维化作用。

四、讨论

(1)本研究结果显示，杠板归总黄