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血糖测定(GOD-POD法)
实验目的掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理和方法。掌握血糖变化的临床意义。掌握比色法原理,学会721分光光度计的使用。
临床意义病理性高血糖:糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。内分泌腺功能障碍:甲状腺功能亢进,肾上腺皮质功能及髓质功能亢进,引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多,或升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。颅内压增高:刺激血糖中枢,如颅外伤,颅内出血,脑膜炎等,引起血糖增高。脱水引起的高血糖:如呕吐,腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。病理性低血糖:特发性功能性低血糖最多见,依次是药源性,肝源性和胰岛素瘤等。
临床意义低血糖<3.3mmol/L高血糖(空腹)>6.9mmol/L生理性高血糖:可见于摄入高糖食物后,或紧张情绪肾上腺素分泌增加时。生理性低血糖:见于饥饿和剧烈运动时。血糖(80~120mg/dL)食物糖消化,吸收肝糖原分解非糖物质糖异生氧化分解CO2+H2O糖原合成磷酸戊糖途径等其它糖脂类、氨基酸合成代谢肝(肌)糖原脂肪、氨基酸尿糖
实验原理---酶法分析偶联酶反应定量法ABC酶1酶2使用此方法条件:当单酶反应的底物或产物用物理化学手段不能区分时(即:当测定A或B很困难时,可用酶2作为指示酶,通过测定C的含量来间接测定A的含量)
实验原理葡萄糖+O2+H2O葡萄糖酸+2H2O2GOD2H2O2+4-氨基安替比林+酚POD红色醌类化合物+4H2O以H2O2酶作指示酶
实验器材试管试管架吸量管分光光度计恒温水浴锅微量加样器吸耳球记号笔光径1cm比色杯
实验试剂葡萄糖标准应用液(5.55mmol/L)酶-酚混合试剂(均来自于市售试剂盒)蒸馏水
实验操作取3支同样规格的干燥试管,精确按照下表加入各试剂。试剂(mL)测定管标准管空白管血清0.02--葡萄糖标准应用液-0.02-蒸馏水--0.02酶酚混合试剂3.03.03.0各管摇匀,置37℃水浴中保温15min。
实验操作在波长505nm下,以空白管调零,测定标准管和测定管的吸光度。计算血糖浓度=测定管吸光度标准管吸光度×葡萄糖标准液的浓度正常参考值为:3.89~6.11mmol/L
注意事项葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量。(因为尿液中尿酸等干扰性物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,而造成结果假性偏低。)血液样品需及时分离血细胞。(因为红细胞的酵解将导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。)严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。
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