《免疫学试验技术》课件.pptVIP

**********************免疫学试验技术免疫学试验技术是现代医学诊断和研究中不可或缺的一部分。课程目标了解免疫学实验的基本原理和技术。掌握常见免疫学实验操作方法，如ELISA、免疫印迹、流式细胞术等。学习免疫学实验结果的分析和判读。实验室基本知识仪器设备了解实验室的各种仪器设备，如显微镜、离心机、培养箱、移液器等，并掌握其基本操作方法。试剂耗材熟悉实验室常用的试剂和耗材，包括抗体、缓冲液、培养基、培养皿等，并了解其性质和使用方法。安全防护熟悉实验室安全操作规范，包括个人防护、试剂安全处理、废弃物处理等，并了解实验室安全事故的应急处理方法。记录管理掌握实验室记录的规范要求，包括实验记录、试剂记录、仪器使用记录等，并养成良好的实验记录习惯。常用实验室设备显微镜用于观察微小的生物样本。离心机用于分离不同密度的物质。培养箱用于培养细胞或微生物。移液器用于精确转移液体。实验室安全知识个人防护实验时务必佩戴实验服、手套和护目镜，以保护自身安全。生物安全处理生物样本时，需严格遵循生物安全操作规范，避免接触危险物质。化学品安全使用化学试剂时，应仔细阅读说明书，并采取必要的防护措施，防止意外事故发生。紧急情况处理熟悉实验室的安全设施，如灭火器、急救箱等，并掌握紧急情况的处理方法。无菌操作技术清洁消毒彻底清洁工作区域并使用合适的消毒剂杀灭细菌和其他微生物。戴手套戴上无菌手套以防止污染样本和培养基。火焰灭菌使用火焰灭菌仪灭菌接种环或针头，在使用前和使用后。无菌操作在无菌环境下进行所有操作，以防止污染。例如，打开培养皿时，要将盖子移到一边，而不是完全打开。细胞培养技术1准备阶段选择合适的培养基和培养皿，并对培养皿进行灭菌处理。2细胞接种将细胞悬液加入培养皿中，并将其置于合适的培养箱中。3培养阶段定期更换培养基，并监控细胞生长情况。4细胞收集当细胞达到所需密度时，将其从培养皿中收集并进行后续分析或实验。细胞计数技术1台盼蓝染色法区分活细胞和死细胞2血球计数板法精确计数细胞数量3自动细胞计数仪高效、准确的计数细胞分离技术1密度梯度离心利用不同密度溶液分离细胞，如淋巴细胞分离。2磁珠分离利用磁珠结合特定抗体分离目标细胞。3流式细胞分选利用激光照射细胞，根据细胞表面标记物进行分选。免疫细胞培养细胞分离使用不同方法从血液、组织或器官中分离出免疫细胞，如密度梯度离心法、磁珠分选法等。细胞培养将分离的免疫细胞在特定的培养基中培养，提供必需的营养物质和生长因子。细胞活化使用抗原、细胞因子或其他刺激物来激活免疫细胞，使其发挥特定的功能。细胞增殖在培养过程中，免疫细胞会增殖，形成更大的细胞群，以便进行进一步的实验。特异性免疫细胞检测1流式细胞术2免疫组化3免疫荧光ELISA检测技术原理1抗原抗体反应ELISA依赖于抗原和抗体之间的特异性结合，从而检测样本中目标物质的存在。2酶联免疫吸附抗体或抗原被固定在固相载体上，形成免疫复合物，并通过酶联反应产生可检测的信号。3显色反应酶催化底物发生颜色变化，颜色深浅与样本中目标物质的浓度成正比。ELISA检测步骤1包被将抗原或抗体包被在酶联免疫吸附板的孔中2封闭用封闭液封闭板孔中的空位，防止非特异性结合3孵育加入待测样品或标准品，与包被的抗原或抗体反应4显色加入酶底物，与酶反应产生颜色变化ELISA结果判读确定阴性、阳性或可疑结果。观察颜色深浅，判断抗原或抗体浓度。绘制标准曲线，定量分析样本中抗原或抗体含量。血凝试验技术原理抗原抗体反应血凝试验是基于抗原抗体反应原理，利用抗体与相应的抗原结合形成可见的凝集现象。红细胞凝集血凝试验中，抗原通常是红细胞，抗体与红细胞表面抗原结合，导致红细胞凝集，形成肉眼可见的凝集现象。特异性反应血凝试验具有高度的特异性，抗体只能与相应的抗原结合，形成特异性的凝集反应。血凝试验步骤1准备工作准备所需的试剂，如抗原、抗体、血清、盐水等，并进行必要的稀释和配制。2血清稀释将待检血清进行一系列梯度稀释，通常从1/2开始，逐步稀释至所需浓度。3加入抗原在试管中加入已稀释的血清和相应的抗原，进行混合反应。4观察结果在适当温度和时间下，观察试管中的反应情况，判断是否发生凝集反应。血凝试验结果判读阳性结果出现凝集现象，表明样本中存在抗体，与红细胞发生反应。阴性结果无凝集现象，表明样本中不存在抗体或抗体浓度过低，无法与红细胞发生反应。免疫印迹技术原理蛋白质分离蛋白质样品通过