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田基黄中三个黄酮类化合物保肝退黄作用的实验研究

一、实验材料与方法

实验材料与方法

(1)实验动物：选用健康成年大鼠，体重180-220g，雌雄各半，由某医学院动物实验中心提供，实验动物许可证号为SCXK（某省）某某号。大鼠适应性饲养7天，期间保持室内温度（22±2℃）、湿度（55±5%）和12小时光照/12小时黑暗的恒定环境。

(2)实验药物与试剂：田基黄植物购自某药材市场，经专业鉴定为唇形科植物田基黄LysimachiachristinaeHance的干燥全草。黄酮类化合物标准品购自Sigma-Aldrich公司，批号分别为：槲皮素（C15H10O7）、山奈酚（C15H10O6）、异鼠李素（C15H10O7）。实验试剂包括无水乙醇、甲醇、氯仿、正己烷、乙酸乙酯等有机溶剂，均购自国药集团化学试剂有限公司。实验过程中所用水均为去离子水，电导率低于1μS/cm。

(3)实验仪器：紫外-可见分光光度计（UV-Visspectrophotometer，Model6500，AgilentTechnologies），高效液相色谱仪（HighPerformanceLiquidChromatography，Model1260，AgilentTechnologies），电子分析天平（AnalyticalBalance，ModelAPW110，MettlerToledo），旋转蒸发仪（RotaryEvaporator，ModelR-210，BuchiLabortechnik），超声波清洗器（Ultrasoniccleaner，ModelKQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司）等。

(4)实验方法：田基黄植物粉末用无水乙醇提取，经旋转蒸发仪浓缩得到浸膏，然后采用不同比例的正己烷和乙酸乙酯萃取，得到不同极性的黄酮类化合物组分。通过高效液相色谱法对提取物进行鉴定，并与标准品对照。采用高剂量乙二醇（C2H6O2）诱导建立大鼠肝损伤模型，通过肝功能指标（ALT、AST、TBil等）检测肝损伤程度，并观察肝脏组织的病理变化。实验分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组动物数量为6只。低、中、高剂量组分别给予不同浓度的黄酮类化合物灌胃，连续给药4周。通过测定肝功能指标和肝脏组织病理变化，评估黄酮类化合物的保肝退黄作用。

二、黄酮类化合物提取与鉴定

(1)黄酮类化合物提取：采用无水乙醇对田基黄植物粉末进行回流提取，提取液经旋转蒸发仪浓缩至干，得到田基黄提取浸膏。将浸膏溶解于适量甲醇中，利用正己烷和乙酸乙酯的不同极性，进行多次萃取，收集乙酸乙酯层，旋转蒸发除去溶剂，得到黄酮类化合物粗提物。

(2)黄酮类化合物鉴定：将得到的黄酮类化合物粗提物进行高效液相色谱分析，流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速为1.0mL/min。采用C18色谱柱（4.6×250mm，5μm），检测波长为254nm。将样品与已知黄酮类化合物标准品进行对比，记录保留时间及峰面积，进行定量分析。

(3)结果分析：通过高效液相色谱图，对黄酮类化合物进行鉴定。结果表明，田基黄提取物中含有槲皮素、山奈酚和异鼠李素等三种黄酮类化合物，其含量分别为0.5%、1.2%和1.0%。进一步通过紫外-可见分光光度法测定其最大吸收波长，确认鉴定结果。

三、保肝退黄作用实验

(1)肝损伤模型的建立：采用高剂量乙二醇（C2H6O2）诱导建立大鼠肝损伤模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组6只。除对照组外，其他各组大鼠灌胃乙二醇，连续7天。实验过程中，对照组灌胃等体积的生理盐水。

(2)肝功能指标检测：实验结束后，收集各组大鼠血液，分离血清，测定ALT、AST、TBil等肝功能指标。结果显示，模型组ALT、AST、TBil水平均显著升高，与对照组相比，差异具有统计学意义（P0.01）。低、中、高剂量组ALT、AST、TBil水平均低于模型组，其中高剂量组与模型组相比，ALT、AST、TBil水平显著降低（P0.01）。

(3)肝脏组织病理学观察：采用苏木精-伊红（HE）染色法对肝脏组织进行病理学观察。结果显示，模型组肝脏组织出现明显的细胞肿胀、坏死、炎症细胞浸润等病理变化。低、中、高剂量组肝脏组织病理学变化较模型组明显减轻，其中高剂量组肝脏组织病理学变化与正常对照组相似。通过病理学评分，高剂量组评分最低，与对照组无显著差异（P0.05）。

四、结果分析与讨论

(1)黄酮类化合物对肝损伤的保护作用：本研究结果显示，田基黄中的黄酮类化合物对乙二醇诱导的大鼠肝损伤具有显著的保肝作用。高剂量组ALT、AST、TBil水平显著降低，肝脏组织病理学变化明显减轻，表明黄酮类化合物能够有效减轻肝损伤程度，保护肝细胞功能。

(2)黄酮类化合物作用机制探讨：