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高效液相色谱碘试剂柱后衍生测定粮油样品中黄曲霉毒素B_(1)的条件

一、流动相及缓冲液配置

(1)流动相的配置是高效液相色谱法中至关重要的步骤，它直接影响到分离效果和检测灵敏度。在测定粮油样品中黄曲霉毒素B?时，通常采用乙腈-水作为流动相。流动相的比例一般为乙腈：水=80:20（体积比），但具体比例可根据实验需求进行调整。例如，在测定花生样品中的黄曲霉毒素B?时，流动相比例调整为乙腈：水=85:15，以提高检测灵敏度。在实际操作中，流动相需使用高效液相色谱级乙腈和水，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，以确保流动相的纯度和稳定性。

(2)缓冲液的配置同样对黄曲霉毒素B?的检测至关重要。在流动相中加入一定浓度的缓冲液，可以调节流动相的pH值，从而优化分离效果。常用的缓冲液有磷酸盐缓冲液和醋酸盐缓冲液。以磷酸盐缓冲液为例，其配置方法为称取13.61g的磷酸二氢钾和28.4g的磷酸氢二钠，溶于水中，定容至1000mL。pH值通常调节至3.0左右，这一pH值条件下，黄曲霉毒素B?的保留时间稳定，峰形良好。在实验过程中，需要定期检查缓冲液的pH值，以保证实验结果的准确性。

(3)流动相及缓冲液的配置过程中，还需注意溶剂的纯度和稳定性。使用高纯度的乙腈和水是保证实验结果准确性的基础。此外，流动相和缓冲液在配置后应储存于清洁、密封的容器中，避免与空气接触，以防止溶剂挥发和污染。在实际操作中，可选用自动进样器，以减少人为操作误差。例如，在测定玉米样品中的黄曲霉毒素B?时，通过优化流动相和缓冲液的配置，将检测限降低至0.5ng/g，达到了国家标准要求。

二、柱后衍生条件设置

(1)柱后衍生技术是高效液相色谱法中提高检测灵敏度和选择性的一种重要手段。在测定粮油样品中黄曲霉毒素B?时，柱后衍生条件的选择对最终检测结果的准确性至关重要。常用的衍生化试剂有4-氨基安替比林和苯甲醛。例如，在测定花生样品中的黄曲霉毒素B?时，采用4-氨基安替比林作为衍生化试剂，其最佳衍生条件为：衍生温度为60℃，衍生时间为15分钟。在此条件下，黄曲霉毒素B?的检测限可达0.5ng/g，远低于国家标准限值。此外，衍生化反应的pH值对衍生效果也有显著影响，通常将pH值调节至9.0左右，以确保衍生反应的完全进行。

(2)柱后衍生装置的设计对衍生化效果有直接影响。常见的柱后衍生装置包括在线衍生装置和离线衍生装置。在线衍生装置具有操作简便、样品处理量大的优点，但衍生效果受流动相组成和流速的影响较大。离线衍生装置则可提供更稳定的衍生化条件，但样品处理量相对较小。例如，在测定玉米样品中的黄曲霉毒素B?时，采用离线衍生装置，通过优化衍生反应条件，将检测限提高至0.2ng/g，显著提高了检测灵敏度。此外，衍生装置的清洗和保养对衍生效果同样重要，定期更换衍生柱和清洗衍生装置可有效避免交叉污染。

(3)柱后衍生检测器对衍生化产物的检测灵敏度也有较大影响。常用的检测器有荧光检测器、二极管阵列检测器和电感耦合等离子体质谱检测器。荧光检测器具有灵敏度高、选择性好等优点，是检测黄曲霉毒素B?的首选检测器。例如，在测定花生样品中的黄曲霉毒素B?时，采用荧光检测器，通过优化检测条件，将检测限降低至0.1ng/g，达到了极低检测限的要求。此外，检测器的波长和灵敏度等参数的调整，对提高检测效果具有重要意义。在实际操作中，需根据样品特性和检测要求，选择合适的检测器和优化检测条件。

三、样品处理方法

(1)样品处理是粮油样品中黄曲霉毒素B?检测的关键步骤，直接影响到后续分析的准确性和灵敏度。首先，样品需经过粉碎和混合，以确保样品的均匀性。对于粮油样品，通常使用粉碎机将样品粉碎至60目以下。粉碎后的样品需充分混合，以确保代表性。接下来，根据样品类型，采用不同的提取方法。对于油脂类样品，常用索氏提取法，使用石油醚作为提取溶剂，提取温度控制在80℃左右，提取时间为4小时。对于谷物类样品，则采用超声辅助提取法，使用乙腈-水溶液作为提取溶剂，超声提取时间为30分钟。

(2)提取后的样品溶液需经过净化处理，以去除杂质，提高检测灵敏度。常用的净化方法有固相萃取（SPE）和液-液萃取。以SPE为例，使用C18小柱对提取液进行净化，首先用5mL水活化小柱，然后用5mL甲醇洗脱，最后用5mL乙腈洗脱目标化合物。洗脱液经氮气吹干后，用流动相复溶于1mL溶液中，过0.22μm微孔滤膜，待检测。对于液-液萃取，则使用正己烷和乙酸乙酯作为萃取溶剂，通过多次萃取和合并有机相，去除杂质。净化后的样品溶液可直接进行高效液相色谱分析。

(3)在样品处理过程中，还需注意样品的储存条件。提取后的样品溶液应置于4℃冰箱中保存，避免长时间暴露于光照和高温环境下，以免黄曲霉毒素B?降解。此外，实验过程中应严格控制操作步骤，避免