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高效液相色谱快速测定玉米中黄曲霉毒素方法研究

一、引言

(1)黄曲霉毒素是一类具有高度毒性的真菌代谢产物，主要污染粮食、油料和坚果等食品，对人类健康构成严重威胁。据世界卫生组织报告，黄曲霉毒素是全球范围内导致肝癌的主要原因之一。据统计，全球每年约有10万人因黄曲霉毒素中毒而死亡，其中约一半发生在非洲和亚洲地区。为了保障食品安全，各国政府都对黄曲霉毒素的检测标准进行了严格规定，例如我国规定玉米中黄曲霉毒素B1的含量不得超过20ng/g。

(2)随着食品工业的快速发展，食品检测技术也在不断进步。高效液相色谱（HPLC）作为一种高效、灵敏的分析技术，已广泛应用于食品、药品和生物制品等领域。近年来，高效液相色谱技术在黄曲霉毒素检测中的应用也日益广泛。HPLC结合荧光检测器、二极管阵列检测器等，能够实现对黄曲霉毒素的高效分离和准确测定。然而，传统的HPLC检测方法存在分析时间长、操作复杂等缺点，难以满足快速检测的需求。

(3)为了提高黄曲霉毒素检测的效率，本研究旨在建立一种高效液相色谱快速测定玉米中黄曲霉毒素的方法。通过优化色谱条件、样品前处理步骤和检测方法，本研究旨在将检测时间缩短至分钟级别，提高检测灵敏度和准确度。本研究将采用反相高效液相色谱法，以乙腈为流动相，采用C18色谱柱，结合荧光检测器，对玉米样品中的黄曲霉毒素B1进行快速测定。通过对实际样品的检测，验证该方法的准确性和可靠性。

二、实验材料与方法

(1)实验材料：本研究选用玉米样品20份，均来自不同地区和不同品种的玉米，以代表我国玉米市场的多样性。所有样品在收获后立即冷藏保存，以防止黄曲霉毒素的进一步生成。此外，实验中还使用了以下材料：高效液相色谱仪（型号：Agilent1260Infinity），荧光检测器（型号：Agilent2998），乙腈（色谱纯，美国Merck公司），甲醇（色谱纯，美国FisherScientific公司），乙酸铵（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），黄曲霉毒素B1标准品（纯度≥99%，美国Sigma-Aldrich公司）。

(2)样品前处理：将玉米样品研磨成粉末，过40目筛，准确称取2.0g粉末置于50ml具塞锥形瓶中。加入10ml80%甲醇溶液，超声提取30分钟，涡旋振荡5分钟。然后，以3000r/min的速度离心10分钟，取上清液于10ml离心管中。向离心管中加入2ml0.1mol/L乙酸铵溶液，混匀，以5000r/min的速度离心5分钟。取上清液，采用固相萃取（SPE）小柱（型号：C18，3ml，美国Agilent公司）进行净化。将上清液通过SPE小柱，依次用2ml水和2ml甲醇进行洗脱，弃去洗脱液，然后用3ml乙腈-水溶液（80:20，V/V）收集目标化合物，氮气吹干，残渣用1ml流动相复溶解。

(3)高效液相色谱条件：采用反相高效液相色谱法，流动相为乙腈-0.1mol/L乙酸铵溶液（80:20，V/V），流速为1.0ml/min，柱温为30℃。采用C18色谱柱（型号：AgilentZorbaxEclipseXDB-C18，4.6×150mm，5μm），荧光检测器激发波长为365nm，发射波长为450nm。对玉米样品中黄曲霉毒素B1进行定量分析，采用标准曲线法进行数据处理，标准曲线的相关系数R2应大于0.99。实际样品的测定过程中，分别取5个不同浓度的黄曲霉毒素B1标准溶液进行校正，以确保测定结果的准确性和重复性。

三、样品制备与处理

(1)样品采集与储存：本研究选取了来自我国不同地区的玉米样品共50份，包括玉米籽粒、玉米粉和玉米油等不同形式。样品采集遵循随机原则，确保样本的代表性。样品在采集后立即置于冰袋中，并在24小时内送至实验室。为了防止黄曲霉毒素的进一步生成，所有样品均在-20℃的低温条件下储存。在实验前，样品从冰箱中取出，室温下平衡至室温，以确保后续实验的准确性。

(2)样品前处理：样品前处理是黄曲霉毒素检测的关键步骤。首先，将玉米样品研磨成粉末，过40目筛，以去除样品中的杂质。准确称取2.0g样品粉末置于50ml具塞锥形瓶中。加入10ml80%甲醇溶液，超声提取30分钟，以确保黄曲霉毒素充分溶解。超声提取过程中，保持样品温度在40℃左右，以利于提取效率。提取完成后，将样品置于涡旋振荡器上，涡旋振荡5分钟，以进一步确保提取效果。

(3)净化与浓缩：提取后的样品离心分离，以去除不溶性杂质。离心条件为3000r/min，离心10分钟。取上清液于10ml离心管中，加入2ml0.1mol/L乙酸铵溶液，混匀。再次以5000r/min的速度离心5分钟，取上清液。使用固相萃取（SPE）小柱（C18，3ml）进行净化。将上清液通过SPE小柱，依次用2ml水和2ml甲醇进行洗脱，弃去洗脱液。收集黄曲霉毒素B1