保健食品安全性毒理学检验及评价.ppt

1检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。目的：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。原理：2小鼠精子畸形试验时间周期：一般为7周3-5天适应期小鼠经口连续染毒5天，于首次给样后的35天处死动物取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验小鼠精子畸形试验0102观察及评价指标：每只动物检查1000个精子，记录精子畸形数目及类型。结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。小鼠精子畸形试验壹目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。贰原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNA复制期，故在前细线期处理。第12～14d采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期：一般为7周013-5天适应期02小鼠经口连续染毒5天，与首次给样后的12-14天处死动物取材，（取材前6h，腹腔注射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检03剂量设计：同骨髓细胞微核试验04小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标：每只动物分析100个中期相细胞，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。结果评价：受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。小鼠睾丸染色体畸变试验如三项致突变试验（Ames试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。试验结果的判定：遗传毒性试验组合目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。01原理：以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续30天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。0230天喂养试验3-5天，大鼠适应期理检查。30天，染毒及实验观察期再进行大体解剖、血液、生化、器官病01020403时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为2月30天喂养试验剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。对于能获得LD50的受试物：最高剂量为10％～25％的LD50，最低剂量组至少为人可能摄入量的3倍。对于不能获得LD50的受试物：最高剂量为人可能摄入量的100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。30天喂养试验血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。C一般情况观察：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周1次体重及2次食物摄入量，计算食物利用率。B生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。D观察及评价指标：A病理检查：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。E30天喂养试验对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量≥人可能摄入量的100倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。01最小观察到有害作用剂量≤人可能摄入量的100倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例≤10％，放弃。02在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。03试验结果的判定：30天喂养试验需大于或等于人摄入量的100倍。在50倍至100倍之间需进行安全性评价，小于50倍需放弃。传统致畸试验：01仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的100倍。国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量的300倍。在100倍至300倍之间需进行慢性毒性试验，小于100倍需放弃。90天喂养试验、繁殖试验：02其它试验结果判断以LD50或30天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。