氧化应激损伤的生物化学诊断.ppt

3.HPLC法本法样品用量少，测定结果准确，灵敏度高GSH最低检出限为3ng。缺点：需HPLC仪，在一般实验室较难完成。邻苯二醛(OPT)+GSHGSH-OPT【方法学评价】HPLC可有效地用于分离样品液中的GSH根据OPT荧光法检测GSH的原理，通过分离的GSH峰测定样品GSH。荧光检测激发波长338nm，发射波长425nm。第91页,共109页，星期六，2024年，5月(二)维生素E测定维生素E是一族维生素的总称，目前已知有7种常见的有α、β、γ和δ4种本法灵敏度较高，是测定维生素E的经典方法。【方法学评价】维生素E同系物的分子结构中存在相同的共轭双键体系，检测在激发波长296nm，发射波长340nm条件下的荧光，可对维生素E定量。1.荧光法第92页,共109页，星期六，2024年，5月α-生育酚于292nm有特异性光吸收胡萝卜素于450nm有较大光吸收2.HPLC-分光光度法生物样品中α-生育酚及胡萝卜素可经过HPLC法较好地分离开来，通过检测不同波长下的光吸收值可测定样品中的它们的含量。第93页,共109页，星期六，2024年，5月HPLC分离样品中维生素E维生素E在激发波长296nm下可发射340nm的荧光根据测试对样品纯度要求选择不同的样品处理方法3.HPLC-荧光分析法HPLC法大大提高了分析的准确度，且能同时分离和测定各种维生素E同系物。缺点是仪器设备较昂贵，分析成本高,不适应于常规检测的要求。【方法学评价】第94页,共109页，星期六，2024年，5月1.2，4-二硝基苯肼(DNPH)比色法抗坏血酸脱氢抗坏血酸脱氢抗坏血酸+DNPH2，4-二硝基苯腙硫脲及硫酸铜H+520nm本法测的是样品中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸总量如省去氧化步骤，样品稳定，则可测脱氢抗坏血酸含量是分光光度法较为理想的方法之一特异性不高，其他碳氢化合物可干扰，加入硫脲可增加DNPH反应的特异性。【方法学评价】(三)维生素C的测定第95页,共109页，星期六，2024年，5月2.荧光分析法抗坏血酸脱氢抗坏血酸脱氢抗坏血酸+邻苯二胺脱氢抗坏血酸对-氮杂萘测定在激发波长350nm，发射波长430nm的荧光本法测定的是抗坏血酸与脱氢抗坏血酸的总量第96页,共109页，星期六，2024年，5月3.氧化酶法抗坏血酸脱氢抗坏血酸抗坏血酸氧化酶脱氢抗坏血酸+Fe3++2，4，6-三(2-吡啶基)-S-三嗪生色物593nm优点是不必对生物样品进行过多的纯化处理，甚至不用脱蛋白样品中的脱氢抗坏血酸须用其他方法测定【方法学评价】第97页,共109页，星期六，2024年，5月4.HPLC法最好的方法，先层析法将样品中的成分分离，再用柱后检测器检测。HPLC-紫外分光光度法(2)HPLC-电化学检测法是此类方法中最为简单的一种最为理想的测定生物样品中抗坏血酸含量的方法返回章目录第98页,共109页，星期六，2024年，5月（一）脂质过氧化标志物检测（丙二醛、脂氢过氧化物）（二）蛋白质氧化损伤指标检测（三）DNA/RNA损伤检测五、氧化应激损伤的标志物检测第99页,共109页，星期六，2024年，5月1.丙二醛(MDA)的测定——TBA比色法操作简便、重复性好，是最常见测定方法本法的线性范围约在5.0～20mmol/L本法回收率较低，约为60%～80%本反应缺乏特异性，测定结果以MDA的相对含量表示影响因素较多【方法学评价】过氧化脂质中的MDA与硫代巴比妥酸(TBA)缩合，形成红色化合物，在532nm处有极大吸收峰。（一）脂质过氧化标志物检测第100页,共109页，星期六，2024年，5月灵敏度高，最低检出限0.16μmol/L样品中的G、Ch、TG、Pr等均不干扰测定操作较简便，结果准确，荧光稳定，不需特殊试剂，经济方便。【方法学评价】MDA可充分与TBA形成荧光缩合物荧光产物的最大激发波