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高效液相色谱法对稻谷及稻谷籽粒中黄曲霉毒素的测定研究

一、1.黄曲霉毒素概述及检测方法

(1)黄曲霉毒素是一类具有高度毒性的次生代谢产物，主要来源于黄曲霉、寄生曲霉和黑曲霉等真菌。它们广泛存在于粮食、油料、饲料和坚果等农产品中，对人体健康造成严重威胁。据世界卫生组织（WHO）报道，黄曲霉毒素是已知最强的化学致癌物之一，其毒性比氰化物还强。黄曲霉毒素B1（AFB1）是最常见的黄曲霉毒素类型，也是国际癌症研究机构（IARC）确定的Ⅰ类致癌物。在1993年，我国将其列为食品污染的主要监控指标之一。据研究，黄曲霉毒素的摄入量与肝癌发病率密切相关，即使是低剂量的长期暴露也可能导致肝癌的发生。

(2)黄曲霉毒素的检测方法多种多样，包括薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）和酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。其中，高效液相色谱法因其高灵敏度、高分辨率和良好的选择性，在黄曲霉毒素检测中得到广泛应用。HPLC检测黄曲霉毒素通常采用荧光检测器，检测限可达0.1～1ng/g。例如，在我国某地区的稻谷样品中，黄曲霉毒素B1的含量检测结果显示，阳性率为5%，平均含量为0.4ng/g，远低于我国食品安全国家标准（≤5ng/g）的要求。

(3)为了提高黄曲霉毒素检测的准确性和效率，研究人员不断优化检测方法。例如，采用固相萃取（SPE）技术结合HPLC检测，可以有效去除样品中的杂质，提高检测灵敏度。在SPE过程中，常用C18、C8或C30等柱填料，对样品进行净化。此外，近年来，液相色谱-串联质谱联用法（LC-MS/MS）在黄曲霉毒素检测中的应用越来越广泛，该方法具有更高的灵敏度和准确性。例如，在2019年的一项研究中，LC-MS/MS检测稻谷样品中黄曲霉毒素B1的检出限可达0.05ng/g，检出率高达95%。这些研究成果为我国粮食质量安全提供了有力保障。

二、2.高效液相色谱法在黄曲霉毒素检测中的应用

(1)高效液相色谱法（HPLC）因其高效、灵敏和准确的特点，已成为黄曲霉毒素检测的重要手段。在黄曲霉毒素的检测中，HPLC通常结合荧光检测器（FLD）或二极管阵列检测器（DAD），以达到对黄曲霉毒素B1（AFB1）、B2（AFB2）、G1（AFG1）和G2（AFG2）等不同同系物的分离和检测。例如，在2018年的一项研究中，研究人员使用HPLC-FLD对玉米样品中的黄曲霉毒素进行了检测，检测限达到0.05ng/g，回收率在80%至100%之间，精密度良好。这一研究为粮食安全提供了有效的监测手段。

(2)在实际应用中，HPLC检测黄曲霉毒素的方法通常包括样品前处理、色谱分离和检测三个步骤。样品前处理是关键环节，它包括样品的提取、净化和浓缩。常用的提取方法有溶剂提取、微波辅助提取和固相萃取等。净化过程通常使用C18、C8或C30等柱填料，去除样品中的杂质。浓缩步骤则通过旋转蒸发或氮吹等方式，将样品浓缩至一定体积。例如，在一项针对花生样品中黄曲霉毒素检测的研究中，研究者采用固相萃取法结合HPLC-FLD，成功检测出样品中的AFB1和AFB2，检测限分别为0.5ng/g和1ng/g。

(3)HPLC在黄曲霉毒素检测中的应用不仅限于单一化合物，还可以用于复合样品的检测。例如，在农产品中，黄曲霉毒素往往与其他污染物共存，如农药残留、重金属等。在这种情况下，HPLC可以与其他分析技术如液相色谱-质谱联用（LC-MS）结合使用，以提高检测的准确性和效率。例如，2017年的一项研究采用LC-MS/MS技术，对小麦样品中的黄曲霉毒素和农药残留同时进行检测，实现了对复杂样品中多种污染物的快速筛查。这种多技术联用的方法在黄曲霉毒素检测中具有重要意义，有助于提高检测的全面性和准确性。

三、3.稻谷及稻谷籽粒中黄曲霉毒素测定的研究实例

(1)在一项针对稻谷及稻谷籽粒中黄曲霉毒素测定的研究中，研究人员选取了不同产地和品种的稻谷样品，共计100份。通过高效液相色谱法（HPLC）结合荧光检测器（FLD），对样品中的黄曲霉毒素B1（AFB1）进行了检测。结果显示，样品中AFB1的平均含量为0.3ng/g，其中10%的样品AFB1含量超过我国食品安全标准（≤5ng/g）。研究还发现，稻谷籽粒中的AFB1含量普遍高于稻谷本身，这可能与籽粒在储存过程中更容易受到黄曲霉污染有关。

(2)在另一项研究中，研究人员对稻谷样品中的黄曲霉毒素B1和B2（AFB1和B2）进行了同时检测。采用HPLC-FLD技术，检测限分别为0.1ng/g和0.2ng/g。通过对100份稻谷样品的检测，发现AFB1的平均含量为0.5ng/g，AFB2的平均含量为0.2ng/g。研究还发现，不同品种的稻谷中AFB1和B2的含量存在显著差异，其中