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高效液相色谱测定乳制品中黄曲霉毒素M1

一、1.引言

(1)黄曲霉毒素M1（AflatoxinM1，AFM1）是一种由黄曲霉和寄生曲霉产生的真菌毒素，主要污染粮食、油料和乳制品等食品。AFM1具有强烈的致癌性和致畸性，对人体健康构成严重威胁。近年来，随着食品安全问题的日益突出，AFM1的检测成为食品安全监管的重要环节。根据世界卫生组织（WHO）和国际食品法典委员会（CodexAlimentariusCommission）的规定，AFM1的最大允许限量分别为0.5和0.2μg/kg。我国对AFM1的检测标准也做出了明确规定，要求在乳制品中AFM1的含量不得超过0.5μg/kg。

(2)乳制品作为人们日常饮食中的重要组成部分，其安全性直接关系到公众的健康。然而，由于乳制品在生产、储存和运输过程中容易受到污染，AFM1的污染问题不容忽视。据统计，全球每年约有12%的乳制品受到AFM1的污染，其中非洲和亚洲地区尤为严重。为了确保乳制品的安全性，各国政府和相关机构纷纷加强对AFM1的检测力度，并采取了一系列预防措施。例如，我国在2015年发布了《食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定》，为AFM1的检测提供了技术依据。

(3)高效液相色谱法（High-PerformanceLiquidChromatography，HPLC）作为一种高效、灵敏、准确的检测技术，被广泛应用于AFM1的测定。HPLC结合荧光检测器（FluorescenceDetector，FD）能够实现对AFM1的高灵敏度检测，检测限可达0.05μg/kg，满足食品安全检测的要求。近年来，随着色谱柱、流动相和检测技术的不断改进，HPLC在AFM1检测中的应用越来越广泛。例如，某研究团队采用HPLC-FD法对乳制品中的AFM1进行了测定，检测结果显示，该方法在0.1～10μg/kg范围内线性关系良好，相关系数（r）为0.999，回收率在85%～95%之间，准确度和精密度均满足国家标准要求。

二、2.样品前处理

(1)样品前处理是高效液相色谱法测定乳制品中黄曲霉毒素M1（AFM1）的关键步骤之一。首先，将采集的乳制品样品进行适当的均质化处理，以确保样品中AFM1的均匀分布。均质化通常通过高速搅拌或均质器完成，以减少样品的分层现象。

(2)接下来，采用固相萃取（SolidPhaseExtraction，SPE）技术对样品进行净化。SPE柱通常使用含有特异性吸附剂的材料，如C18或C8，以吸附AFM1。样品通过SPE柱时，AFM1被吸附在柱上，而其他杂质则通过柱流出。随后，使用适当的溶剂（如甲醇或乙腈）对SPE柱进行洗脱，AFM1从吸附剂上解吸下来，收集洗脱液。

(3)收集到的洗脱液需要进行浓缩和复溶于适当的流动相中，以便进行HPLC分析。浓缩通常通过旋转蒸发仪或氮吹仪完成，以去除溶剂并浓缩样品。浓缩后的样品在分析前需通过0.22μm的滤膜过滤，以去除可能存在的颗粒物，确保检测的准确性。最后，样品在HPLC分析前需在适当的温度下平衡，以减少样品体积变化对分析结果的影响。

三、3.高效液相色谱法（HPLC）检测原理及操作

(1)高效液相色谱法（High-PerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种分离和检测混合物中各组分的技术，广泛应用于食品、药品和环境样品的分析。在黄曲霉毒素M1（AFM1）的测定中，HPLC结合荧光检测器（FluorescenceDetector，FD）可以实现高灵敏度和高选择性的检测。HPLC检测原理基于样品组分在固定相和流动相之间的分配系数差异。当流动相（通常为水溶液）通过固定相（如硅胶、反相或离子交换柱）时，样品中的不同组分由于与固定相相互作用的不同，会在固定相上停留不同时间，从而实现分离。

(2)操作过程中，首先将经过样品前处理的AFM1样品溶液注入HPLC系统中。流动相由高压泵输送，通过色谱柱时，AFM1等目标化合物与固定相发生相互作用，而其他杂质则迅速通过色谱柱。经过色谱柱的分离后，样品组分依次进入检测器。在AFM1的测定中，荧光检测器是最常用的检测器之一。AFM1在特定波长下被激发后，会发出荧光信号，通过检测荧光信号的强度和波长，可以定量分析AFM1的含量。操作过程中，需要严格控制流动相的组成、流速和检测器的设置，以确保检测结果的准确性和重现性。

(3)HPLC检测AFM1的操作步骤包括：准备色谱柱、设置流动相和梯度洗脱程序、校准检测器、进样和分析。在分析前，色谱柱需要在室温下平衡一段时间，以确保其性能稳定。进样时，需将样品溶液通过进样阀注入色谱柱。流动相通过梯度洗脱程序，逐步改变流动相的组成，以实现样品组分的最佳分离。分析完成后，记录色谱图，通过分析软件对