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高效液相色谱法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的不确定度分析_

一、1.测定方法概述

(1)高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，在粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）含量的测定中表现出较高的灵敏度和准确性。该方法基于DON在特定条件下与高效液相色谱柱的相互作用，通过检测器对DON进行定量分析。以我国某粮食检验机构为例，该机构采用HPLC法测定粮食中DON含量，检测限可达0.5μg/kg，定量限为1.0μg/kg，满足我国相关食品安全标准的要求。

(2)测定过程中，样品前处理步骤至关重要。通常包括样品的采集、制备、提取和净化等环节。以小麦样品为例，采集后的样品需经过粉碎、过筛等预处理步骤，然后采用酸水提取法进行提取。提取液经过固相萃取柱净化，去除干扰物质，净化后的样品溶液进入HPLC系统进行分析。在实际操作中，提取回收率通常在70%至90%之间，表明该方法具有较高的提取效率。

(3)HPLC法测定DON含量的检测过程包括流动相的准备、色谱柱的选择、流速和柱温的设定等。流动相通常采用水-乙腈混合溶液，流速设置为1.0mL/min，柱温控制在30℃左右。以某品牌高效液相色谱仪为例，其检测器为二极管阵列检测器（DAD），检测波长为210nm。在该条件下，DON的保留时间约为10分钟，峰面积与浓度呈线性关系，相关系数R2大于0.99。此外，该方法还具备良好的重复性和稳定性，为粮食中DON含量的准确测定提供了有力保障。

二、2.不确定度来源分析

(1)在高效液相色谱法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）含量的不确定度分析中，不确定度来源主要包括以下几个方面。首先，样品制备过程中存在的不确定度，如样品的代表性、制备过程中的操作误差等。例如，在样品采集过程中，由于采样点的不确定性，可能导致样品的代表性不足，从而影响最终测定结果。

(2)其次，仪器设备的不确定度也是一个重要的来源。高效液相色谱仪、检测器等设备本身的性能和操作条件的不确定性都会对测定结果产生影响。例如，色谱柱的柱效、检测器的灵敏度、流动相的稳定性等都会导致不确定度。此外，仪器校准的不准确也会引入不确定度，如色谱柱的线性范围、检测器的响应曲线等。

(3)第三，分析方法的不确定度也不容忽视。这包括标准曲线的制备、方法的精密度、样品的提取和净化等。标准曲线的制备过程中，标准品的准确浓度、加标回收率等都会影响不确定度。在样品的提取和净化过程中，提取效率、净化效果、残留物的去除等都会对测定结果产生影响。此外，实验操作人员的技能水平、环境条件的变化等也会引入不确定度。因此，在进行不确定度分析时，需要综合考虑这些因素，以全面评估测定结果的不确定度水平。

三、3.各个不确定度分量的评估

(1)在评估高效液相色谱法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）含量的不确定度分量时，首先考虑的是样品制备过程中的不确定度。以某实验室为例，通过对100个样品进行重复制备，发现样品制备过程中的相对标准偏差（RSD）为5.2%，表明样品制备过程的不确定度主要来源于操作者的技能和样品的代表性。此外，通过添加已知浓度的DON标准品进行加标回收实验，回收率在95%至100%之间，表明样品制备方法较为稳定。

(2)对于仪器设备的不确定度分量，主要考虑色谱柱的柱效、检测器的灵敏度以及流动相的稳定性。以某型号高效液相色谱仪为例，经过测试，色谱柱的柱效RSD为1.8%，检测器的灵敏度RSD为2.5%，流动相的稳定性RSD为3.0%。这些数据表明，仪器设备的不确定度对测定结果的影响较小，但仍需在实验过程中严格控制。

(3)分析方法的不确定度分量，包括标准曲线的制备、方法的精密度和样品的提取净化。某实验室在制备标准曲线时，通过测定6个不同浓度的DON标准品，得到的标准曲线的相关系数R2为0.9999，表明标准曲线的线性关系良好。在方法的精密度方面，对同一批样品进行10次重复测定，RSD为4.1%，表明方法具有良好的重复性。在样品的提取净化过程中，通过优化提取溶剂和净化条件，提取回收率稳定在85%至95%之间，净化效果良好。

四、4.不确定度合成

(1)在合成高效液相色谱法测定粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）含量的不确定度时，首先需要将各个不确定度分量按照其类型和影响程度进行分类。例如，样品制备过程中的不确定度分为A类不确定度，仪器设备的不确定度分为B类不确定度，分析方法的不确定度分为C类不确定度。以某实验室测定结果为例，样品制备过程中的不确定度分量为5%，仪器设备的不确定度分量为3%，分析方法的不确定度分量为2%。

(2)接下来，根据各不确定度分量的自由度，采用合适的统计方法进行合成。以A类不确定度为例，假设其自由度为50，B类不确定度的自由度为30，C类不确定度的自