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高效液相色谱法分析(黄曲霉毒素B1)原始记录

一、样品信息

(1)本实验所用样品为某品牌花生油，采购于本地大型超市。样品编号生产批号为202011，生产日期为2020年11月。样品在采集后立即放入冰箱保存，避免样品受到光、热、氧等因素的影响。在分析前，样品经过适当的预处理，包括去除杂质、过滤和稀释，以确保分析的准确性和可靠性。

(2)样品预处理过程中，首先将花生油样品在室温下放置一段时间，使其温度与实验室环境温度一致。随后，将样品进行均质化处理，确保样品中黄曲霉毒素B1的分布均匀。预处理后的样品按照1:10的比例用正己烷稀释，稀释后的溶液用0.22微米滤膜过滤，以去除可能存在的悬浮颗粒。

(3)样品的质量控制和检测过程严格遵守了GB/T5009.26-2016《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》的规定。在样品采集、处理、保存和运输的每个环节都确保了样品的完整性，避免黄曲霉毒素B1的含量受到任何外界因素的干扰。样品的具体信息，包括采集日期、保存条件、预处理方法等，均详细记录在实验记录中，以备后续查阅和分析。

二、仪器和试剂

(1)本实验所使用的仪器主要包括高效液相色谱仪（HPLC），型号为Agilent1260Infinity，配备二极管阵列检测器（DAD）和自动进样器。该HPLC系统具备较高的分离效率和稳定性，适用于复杂样品中黄曲霉毒素B1的分析。流动相为甲醇-水溶液，比例为80:20（V/V），流速为1.0mL/min。柱温设定为30°C，以保持黄曲霉毒素B1的稳定性。在2019年的一项研究中，使用相同型号的HPLC系统对玉米样品中的黄曲霉毒素B1进行了检测，成功实现了低浓度样品的定量分析。

(2)试剂方面，实验中所用正己烷、甲醇均为色谱纯，购自Sigma-Aldrich公司。实验前，正己烷和甲醇均需经过超声波清洗，以去除可能存在的杂质。此外，实验中还使用了黄曲霉毒素B1标准品，纯度为99%，购自国家标准物质中心。标准品在实验前需进行复溶，以制备不同浓度的标准溶液。在2020年的一项研究中，通过优化黄曲霉毒素B1标准品的复溶过程，提高了标准曲线的线性范围和精密度。

(3)实验中使用的固相萃取柱（SPE）为WatersOasisHLB，型号为WAX，主要用于样品的净化。SPE柱的预处理包括使用6mL甲醇和6mL水活化，以确保柱子的最佳性能。在样品处理过程中，将预处理后的样品溶液通过SPE柱，收集流出液，并使用氮气吹干。随后，用正己烷复溶于1mL溶液中，以备HPLC分析。在2021年的一项研究中，通过优化SPE柱的预处理和样品处理步骤，显著提高了黄曲霉毒素B1的回收率和检测限。

三、实验步骤

(1)实验开始前，首先对高效液相色谱仪进行系统校正，包括柱温、流速和流动相的稳定性检查。校正完成后，将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，确保样品无悬浮颗粒。随后，将过滤后的样品溶液按照1:10的比例用正己烷稀释，以降低样品浓度，便于后续分析。

(2)在固相萃取步骤中，将活化后的SPE柱装填入固相萃取装置中。将稀释后的样品溶液通过SPE柱，流速控制在1mL/min。收集SPE柱的流出液，并在50°C条件下用氮气吹干。吹干后，用1mL正己烷复溶，转移至自动进样器，准备进行HPLC分析。

(3)HPLC分析前，将标准品溶液按照相同比例用正己烷稀释，制备不同浓度的标准曲线。将标准曲线溶液和样品溶液依次进样，记录峰面积。根据标准曲线，计算样品中黄曲霉毒素B1的含量。实验过程中，每批样品均进行空白实验，以排除试剂和仪器带来的干扰。实验数据记录在实验记录表中，包括样品编号、进样时间、峰面积、浓度等。

四、结果分析

(1)在本次实验中，使用高效液相色谱法对花生油样品中的黄曲霉毒素B1进行了定量分析。实验共检测了10个样品，其中9个样品检测出黄曲霉毒素B1，平均含量为2.5ng/g，符合GB/T5009.26-2016《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定的最大限量标准（20ng/g）。在检测过程中，标准曲线的线性范围为0.1-10ng/mL，相关系数（R2）为0.999。以某品牌花生油为例，其黄曲霉毒素B1含量为3.2ng/g，略高于国家标准，但未超过最大限量。该结果表明，本实验方法具有良好的准确性和可靠性。

(2)对实验数据进行统计分析，发现样品中黄曲霉毒素B1含量的标准差为0.5ng/g，变异系数（CV）为20%，说明实验结果具有较高的重现性。在相同条件下，对同一样品进行重复实验，其结果一致，进一步验证了实验方法的准确性。此外，与同类研究相比，本实验的检测限为0.05ng/g，低于其他研究的检测限（0.1ng/g），表明本实验方法具有较高的灵敏度。例如，在2020年的一项研究中，采用同样的方法对玉