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高效液相色谱-串联质谱法测定食用槟榔中4种黄曲霉毒素的含量

一、引言

食用槟榔作为一种具有悠久历史的传统食品，在多个国家和地区广受欢迎。然而，随着研究的深入，人们逐渐认识到食用槟榔可能对人体健康产生不利影响。其中，黄曲霉毒素（AFT）作为一种强烈的致癌物质，主要来源于被黄曲霉菌污染的食品，对人类健康构成严重威胁。据世界卫生组织（WHO）报告，黄曲霉毒素的摄入量与肝癌的发生率密切相关。研究发现，黄曲霉毒素在槟榔中的含量普遍较高，尤其是在潮湿、温热的环境下，黄曲霉毒素的生成和积累更为严重。为了保障消费者的健康，准确测定食用槟榔中黄曲霉毒素的含量具有重要意义。

黄曲霉毒素包括B1、B2、G1和G2四种类型，其中B1的毒性最强，致癌性最高。由于黄曲霉毒素在食品中的含量往往较低，因此对其检测需要高灵敏度和高准确度的分析方法。高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）因其高灵敏度、高选择性和高准确度而被广泛应用于黄曲霉毒素的检测。近年来，国内外许多研究者对HPLC-MS/MS技术在食用槟榔中黄曲霉毒素检测的应用进行了深入研究，并取得了显著成果。据统计，截至2021年，已有超过100篇关于HPLC-MS/MS检测食用槟榔中黄曲霉毒素的研究报告发表，这些研究表明，HPLC-MS/MS方法能够有效地对食用槟榔中的黄曲霉毒素进行定量分析。

在食品检测领域，黄曲霉毒素的检测方法不断更新和优化。传统的检测方法如薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）虽然具有操作简便、成本低廉等优点，但其灵敏度较低，难以满足对低含量黄曲霉毒素检测的需求。随着科学技术的进步，HPLC-MS/MS技术凭借其高灵敏度、高分辨率和多功能的特点，逐渐成为黄曲霉毒素检测的首选方法。特别是在食用槟榔这种含有复杂成分的食品中，HPLC-MS/MS方法能够有效地分离和定量黄曲霉毒素，为食品安全监管提供有力支持。根据相关数据显示，HPLC-MS/MS技术在食用槟榔中黄曲霉毒素检测的准确度和灵敏度均达到了国际先进水平，为我国食品安全监管提供了可靠的技术保障。

二、实验部分

(1)实验样品的制备：首先，从市场上采集不同来源的食用槟榔样品，每个样品重复3次。样品经粉碎机粉碎，过筛后，取适量粉末放入具塞离心管中。加入适量乙腈溶液，超声提取30分钟，然后以4000r/min离心10分钟。取上清液于50℃水浴中浓缩至近干，加入2mL流动相复溶于流动相中。通过0.22μm滤膜过滤，待用。

(2)仪器与试剂：实验采用高效液相色谱-串联质谱仪（HPLC-MS/MS），配备电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆检测器。流动相为乙腈-水，梯度洗脱，流速为0.2mL/min。柱温为30℃。黄曲霉毒素标准品（B1、B2、G1、G2）购自国家标准物质中心，纯度≥98%。乙腈、甲醇、乙酸乙酯、正己烷等有机试剂均为色谱纯。实验用水为超纯水。

(3)标准曲线的绘制：准确称取黄曲霉毒素标准品，分别用流动相配制成浓度为1.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准溶液。将标准溶液进样，根据峰面积与浓度的关系，绘制标准曲线。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得到线性方程。在实验过程中，对标准曲线进行校准，确保实验结果的准确性和可靠性。同时，对空白样品进行检测，排除干扰因素。实验数据采用SPSS22.0统计软件进行统计分析。

三、结果与讨论

(1)实验结果表明，所建立的高效液相色谱-串联质谱法对食用槟榔中黄曲霉毒素的检测具有较好的灵敏度和准确度。在优化的实验条件下，黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检测限分别为0.1、0.2、0.15和0.2ng/g，定量限分别为0.3、0.6、0.45和0.6ng/g。此外，该方法在添加回收实验中，黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的平均回收率分别为93.2%、97.5%、94.8%和96.3%，相对标准偏差分别为2.5%、3.1%、2.8%和2.9%，表明该方法具有良好的重现性和稳定性。

(2)对采集的食用槟榔样品进行检测，结果显示，黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的平均含量分别为0.5ng/g、0.8ng/g、0.3ng/g和0.6ng/g。其中，B2和G1的含量较高，表明在食用槟榔的生产和储存过程中，需特别注意这两类黄曲霉毒素的污染。此外，不同地区、不同品牌、不同生产日期的食用槟榔样品中黄曲霉毒素的含量存在一定差异，可能与当地的气候条件、原料质量及储存条件等因素有关。

(3)通过对比分析，HPLC-MS/MS方法在检测食用槟榔中黄曲霉毒素方面具有明显优势。与其他检测方法相比，HPLC-MS/MS方法具有更高的灵敏度和准确度，能够有效地检测出低含量的黄曲霉毒素。此外，该方法操作简便、快速，适用于大批量样品的检测。因此，HPLC