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食品中黄曲霉毒素的测定方法[发明专利]

一、背景技术

(1)黄曲霉毒素是一类广泛存在于食品和环境中的真菌毒素，主要由黄曲霉和寄生曲霉产生。这类毒素具有极强的致癌性，长期摄入可导致肝脏疾病，甚至引发肝癌。随着全球食品产业链的扩展和复杂化，食品中黄曲霉毒素的污染问题日益凸显，对公众健康构成了严重威胁。因此，开发高效、准确的黄曲霉毒素检测方法对于保障食品安全至关重要。

(2)目前，黄曲霉毒素的检测方法主要包括薄层层析法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附测定法等。其中，薄层层析法因其操作简便、成本低廉而被广泛应用，但其灵敏度较低，难以满足实际检测需求。高效液相色谱法具有较高的灵敏度和准确度，但需要复杂的样品前处理和昂贵的仪器设备，限制了其在基层实验室的应用。酶联免疫吸附测定法操作简便，但存在交叉反应和灵敏度不足的问题。

(3)针对现有黄曲霉毒素检测方法的不足，本发明提出了一种基于纳米技术的快速检测方法。该方法采用纳米材料作为检测载体，通过特定的化学或生物传感器与黄曲霉毒素发生特异性反应，从而实现对样品中黄曲霉毒素的快速、灵敏检测。该技术具有操作简便、检测速度快、成本低廉等优点，有望在食品安全检测领域得到广泛应用。

二、发明内容

(1)本发明提供了一种食品中黄曲霉毒素的测定方法，该方法基于纳米材料与黄曲霉毒素的特异性相互作用。该方法首先通过制备一种具有高亲和力的纳米复合材料，该材料能够有效地与黄曲霉毒素结合。具体地，纳米复合材料由特定的纳米颗粒和识别黄曲霉毒素的配体组成，纳米颗粒表面修饰有能够增强配体与黄曲霉毒素结合能力的功能基团。

(2)在样品处理步骤中，将待测食品样品与纳米复合材料混合，黄曲霉毒素与纳米复合材料中的配体发生特异性结合。通过适当的洗涤步骤去除未结合的杂质，从而富集和纯化目标毒素。随后，利用荧光光谱、比色法或电化学方法等对结合在纳米复合材料上的黄曲霉毒素进行定量分析。本发明中的纳米复合材料具有良好的生物相容性和稳定性，能够多次重复使用，提高了检测方法的效率和经济效益。

(3)本发明的方法还具有以下特点：首先，检测过程快速简便，从样品处理到结果输出仅需数小时，适合大规模样品检测；其次，检测灵敏度较高，能够检测到极低浓度的黄曲霉毒素，满足食品安全标准的要求；再者，该方法对环境友好，无需使用大量的有机溶剂和有害化学物质，降低了实验室污染的风险。此外，本发明提供的方法具有较强的通用性，适用于多种食品样品中黄曲霉毒素的检测，具有广泛的应用前景。

三、实验部分

(1)实验采用市售的黄曲霉毒素B1标准品进行纳米复合材料的制备。首先，以金纳米粒子为基础，通过化学修饰引入识别黄曲霉毒素B1的抗体片段。通过优化抗体与纳米粒子的结合比例，制备出具有高亲和力的纳米复合材料。实验中，分别测试了抗体与纳米粒子结合比例从1:10到1:100的样品，结果表明当比例为1:50时，复合材料的结合能力最佳。

(2)在样品处理实验中，取50g花生油作为待测样品，按照1mg/kg的浓度加入黄曲霉毒素B1标准品，使其含量达到10ng/g。将样品与制备好的纳米复合材料混合，室温下反应1小时。经过三次洗涤去除未结合物质后，利用紫外-可见分光光度计检测结合在纳米复合材料上的黄曲霉毒素B1。结果显示，在最大吸收波长下，吸光度与黄曲霉毒素B1浓度呈良好的线性关系，相关系数R2为0.998。

(3)为了验证本发明的实用性，选取了10个不同来源的食品样品进行黄曲霉毒素B1检测。这些样品包括花生、玉米、大米、豆类等。通过将样品与纳米复合材料混合，经过洗涤、检测等步骤，成功检测出其中8个样品中存在黄曲霉毒素B1，其含量分别为2.5ng/g、5.0ng/g、3.2ng/g、4.8ng/g、2.1ng/g、6.5ng/g、3.9ng/g、4.2ng/g。这些检测结果与国家标准方法进行对比，一致性达到95%以上，表明本发明方法具有较高的准确性和可靠性。

四、结果与分析

(1)通过实验结果分析，本发明所提出的黄曲霉毒素测定方法展现出良好的性能。在检测灵敏度方面，本方法对黄曲霉毒素B1的检测限达到0.5ng/g，远低于国际食品安全标准规定的最低检测限。在重复性实验中，同一批次样品的测定标准偏差为0.8ng/g，变异系数为3.5%，表明该方法具有良好的重复性。

(2)在实际样品检测中，本发明方法成功检测了10个不同来源的食品样品中的黄曲霉毒素B1。其中，8个样品检出黄曲霉毒素B1，含量分别为2.5ng/g、5.0ng/g、3.2ng/g、4.8ng/g、2.1ng/g、6.5ng/g、3.9ng/g、4.2ng/g。与国家标准方法相比，本发明方法在检测结果上的一致性达到95%以上，表明该方法具有较高的准确度。

(3)在与现有检测方法的对比中，本发明方法在检测速度上具有