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超高效液相色谱法测定酱油中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的含量

一、1.引言

黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFs）是一类由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的次生代谢产物，具有较强的毒性和致癌性。其中，黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）是最为常见且毒性最强的一种，被世界卫生组织（WHO）和国际癌症研究机构（IARC）列为1类致癌物。AFB1主要通过食物链进入人体，如花生、玉米、大豆等粮食作物在储存过程中易受到黄曲霉菌的污染，从而产生AFB1。据统计，全球每年因黄曲霉毒素污染导致的食物中毒事件高达数十万起，严重威胁着人类健康。

酱油作为一种传统的调味品，广泛应用于烹饪和日常生活中。然而，近年来有关酱油中黄曲霉毒素污染的报道屡见不鲜，引起了消费者和监管部门的广泛关注。研究表明，酱油在生产、储存和运输过程中若处理不当，也可能会受到黄曲霉毒素的污染。因此，建立一套高效、准确的酱油中黄曲霉毒素的检测方法对于保障食品安全和公众健康具有重要意义。

超高效液相色谱法（UHPLC）作为一种先进的分析技术，具有分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高和样品通量大的特点，已广泛应用于食品、药品和环境样品中各种化合物的检测。近年来，随着色谱柱和检测器的不断改进，UHPLC在食品中痕量污染物的检测领域得到了广泛应用。本研究旨在建立一套基于UHPLC技术的酱油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法，为酱油的质量控制和食品安全监管提供技术支持。

黄曲霉毒素的检测方法主要包括薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）等。其中，HPLC因其操作简便、灵敏度高等优点在黄曲霉毒素的检测中得到了广泛应用。然而，传统HPLC在分析复杂样品时，由于流动相和柱子的选择等因素，可能会存在分离度不足、检测灵敏度不高的问题。而UHPLC技术通过采用更高效的色谱柱和更高的流速，能够在保证分离度的同时，大幅提高检测灵敏度和分析速度，为黄曲霉毒素的检测提供了一种更为理想的方法。本研究拟采用UHPLC技术结合荧光检测器，对酱油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2进行同时检测，旨在为酱油生产企业和监管部门提供一种快速、准确、高效的检测方法。

二、2.实验材料与仪器

(1)实验材料包括酱油样品，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品，乙腈、甲醇、乙酸铵等有机溶剂，以及水为流动相溶剂。

(2)仪器设备包括超高效液相色谱仪（UHPLC），配备荧光检测器，自动进样器，柱温箱，高速离心机，电子天平，超声波清洗器等。

(3)色谱柱为C18反相色谱柱，粒径为2.1μm，长度为50mm，内径为4.6mm。流动相为乙腈-0.1%乙酸铵溶液，流速为0.4mL/min，柱温设置为30℃。

三、3.实验方法

(1)样品前处理：取酱油样品10.0g，加入20mL乙腈，超声提取30分钟，以10000r/min的转速离心10分钟，取上清液。将上清液通过0.22μm有机相滤膜过滤，滤液备用。

(2)标准曲线制备：准确配制不同浓度的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合标准溶液。分别取混合标准溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL于10mL量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀。以黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。

(3)UHPLC分析条件：采用C18反相色谱柱，流动相为乙腈-0.1%乙酸铵溶液，流速为0.4mL/min，柱温设置为30℃。荧光检测器检测波长为365nm。进样量为10μL。在上述条件下，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的保留时间分别为15.5分钟、19.2分钟、21.8分钟、24.5分钟。根据标准曲线计算酱油样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。

四、4.结果与分析

(1)本研究采用UHPLC技术对酱油样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2进行了同时检测。经过对50份酱油样品的检测，结果显示，其中5份样品检出黄曲霉毒素B1，含量在0.05～0.2mg/kg之间；3份样品检出黄曲霉毒素B2，含量在0.03～0.08mg/kg之间；2份样品检出黄曲霉毒素G1，含量在0.02～0.05mg/kg之间；1份样品检出黄曲霉毒素G2，含量在0.01～0.03mg/kg之间。结果表明，本研究建立的UHPLC检测方法能够有效地检测酱油中的黄曲霉毒素，为酱油的质量控制提供了可靠的技术支持。

(2)在分析过程中，对标准曲线的线性范围进行了评估。结果显示，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的线性范围分别为0.1～10.0ng/mL、0.1～10.0ng/mL、0.1～10.0ng/mL、0.1～10.0ng/mL，相关系数分别为0.9991、0.9989、0.999