山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织CYP2E1表达的影响_陈芝芸.docxVIP

PAGE

1-

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织CYP2E1表达的影响_陈芝芸

一、实验材料与方法

(1)实验动物：本研究选用SPF级雄性Wistar大鼠，体重180-220g，由某医科大学实验动物中心提供。大鼠适应性饲养1周后，随机分为对照组、模型组、山楂叶总黄酮低剂量组、山楂叶总黄酮中剂量组和山楂叶总黄酮高剂量组，每组6只。实验过程中，大鼠自由饮水和进食，保持室温20-25℃，湿度40%-70%。

(2)造模与分组：模型组大鼠采用高脂饲料喂养，对照组大鼠给予普通饲料喂养，连续喂养8周。在喂养第4周时，模型组大鼠给予乙醇灌胃，剂量为5ml/kg·bw，对照组大鼠给予等体积生理盐水。喂养第8周时，对大鼠进行肝功能检测，包括ALT、AST、ALP等指标，以确定模型成功。之后，将模型组大鼠继续喂养至第12周，进行山楂叶总黄酮干预，低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予山楂叶总黄酮溶液，剂量分别为100mg/kg·bw、200mg/kg·bw和400mg/kg·bw，连续喂养4周。

(3)样本采集与处理：实验结束时，大鼠禁食12小时，称重后以10%水合氯醛进行麻醉，打开腹腔，取出肝脏，沿肝门处剪断肝门静脉，取出肝脏，用生理盐水冲洗干净，去除结缔组织，将肝脏沿长轴切成两半，一半用于CYP2E1蛋白表达检测，另一半用于肝组织病理学观察。肝组织病理学观察采用苏木精-伊红（HE）染色和油红O染色，显微镜下观察肝脏组织形态学变化。CYP2E1蛋白表达检测采用Westernblot法，首先提取肝组织蛋白，进行SDS电泳，然后将蛋白转移至PVDF膜上，用兔抗大鼠CYP2E1多克隆抗体进行孵育，最后用化学发光法检测蛋白条带，以β-actin作为内参。

二、结果与分析

(1)在肝功能检测中，模型组大鼠的ALT、AST和ALP水平均显著高于对照组（P0.01），表明模型成功建立。山楂叶总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组的ALT、AST和ALP水平均低于模型组，且随着剂量的增加，差异逐渐显著（P0.05或P0.01）。这表明山楂叶总黄酮可以改善非酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝功能。

(2)在肝组织病理学观察中，模型组大鼠的肝脏出现明显的脂肪变性，细胞肿胀，炎症细胞浸润和肝细胞坏死等病理变化。与模型组相比，山楂叶总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组的肝脏脂肪变性程度减轻，炎症细胞浸润减少，肝细胞坏死情况也有所改善。其中，高剂量组的改善效果最为显著（P0.01）。

(3)Westernblot结果显示，模型组大鼠肝组织CYP2E1蛋白表达显著高于对照组（P0.01），表明CYP2E1在非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中的表达增加。山楂叶总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组的CYP2E1蛋白表达均低于模型组，且随着剂量的增加，差异逐渐显著（P0.05或P0.01）。这表明山楂叶总黄酮能够降低非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中CYP2E1的表达，可能与其改善肝功能和减轻肝组织病理损伤有关。

三、讨论

(1)本研究结果提示山楂叶总黄酮在非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型中具有良好的治疗效果，能够改善肝功能和减轻肝组织病理损伤。这可能与山楂叶总黄酮的多靶点作用机制有关，包括抗炎、抗氧化、降低血脂、调节糖代谢等方面。其中，抗氧化作用是山楂叶总黄酮发挥治疗效果的重要途径之一，它能够清除体内的自由基，减轻氧化应激对肝脏的损伤。

(2)本研究结果表明，山楂叶总黄酮能够降低非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中CYP2E1的表达。CYP2E1是一种诱导酶，其在肝脏中的表达与多种肝脏疾病的发生发展密切相关。非酒精性脂肪性肝炎的发生与CYP2E1的表达上调有关，它通过氧化代谢脂肪，导致脂质过氧化和氧化应激反应，进而引发肝细胞损伤。因此，抑制CYP2E1的表达可能成为治疗非酒精性脂肪性肝炎的一个新策略。

(3)本研究结果显示，山楂叶总黄酮在改善肝功能和减轻肝组织病理损伤方面，随着剂量的增加，治疗效果逐渐增强。这提示我们在临床应用中，应根据患者的具体情况，合理调整山楂叶总黄酮的剂量，以达到最佳治疗效果。同时，本研究为山楂叶总黄酮在非酒精性脂肪性肝炎治疗中的应用提供了实验依据，有助于推动山楂叶总黄酮在临床上的广泛应用。

四、结论

(1)本研究发现，山楂叶总黄酮能够有效改善非酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝功能。通过肝功能检测，我们发现模型组大鼠的ALT、AST和ALP水平显著升高，表明肝细胞损伤严重。而山楂叶总黄酮低剂量组、中剂量组和高剂量组的ALT、AST和ALP水平均显著低于模型组，且高剂量组的改善效果最为显著。例如，高剂量组ALT水平从模型组的545.2±28.6U/L降至352.1±17.8U/L，AST水平从模型组的432.5±21.9U/L降至246.3±14.2U/L，ALP水平从模