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黄曲霉毒素检测

一、黄曲霉毒素概述

(1)黄曲霉毒素是一类具有高度毒性的次级代谢产物，主要由黄曲霉属和寄生曲霉属的某些菌株产生。这些毒素主要污染粮食、油料和坚果等食品，对人类和动物健康构成严重威胁。据世界卫生组织（WHO）报告，黄曲霉毒素是导致肝癌的主要环境因素之一。研究表明，黄曲霉毒素B1（AFB1）的致癌性最强，其致癌剂量仅为0.1微克/千克体重。近年来，随着全球粮食生产、储存和运输环节的增加，黄曲霉毒素污染问题日益严重，已成为食品安全领域的重要关注点。

(2)黄曲霉毒素的检测方法主要包括化学法、免疫法和分子生物学法等。其中，化学法如薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）等，具有操作简便、成本低廉等优点，但灵敏度较低。免疫法如酶联免疫吸附测定（ELISA）和免疫亲和层析法等，具有较高的灵敏度和特异性，但易受交叉反应的影响。分子生物学法如聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR等，具有高灵敏度和特异性，但操作复杂，成本较高。在实际应用中，常根据检测目的、样品类型和实验室条件等因素选择合适的检测方法。

(3)2018年，我国发布了《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B1的测定》（GB5009.22-2016）等系列标准，对黄曲霉毒素的检测方法和限量标准进行了明确规定。根据我国食品安全风险评估结果，粮食、油料和坚果等食品中黄曲霉毒素B1的限量标准分别为：稻谷、玉米、花生及其制品为≤10微克/千克，小麦、大麦、燕麦、高粱、黑米、小米、薏仁米、杂粮及其制品为≤5微克/千克，食用油为≤20微克/千克。近年来，我国食品安全监管部门加大了对黄曲霉毒素污染的监管力度，通过加强源头防控、强化抽检监测等措施，有效降低了黄曲霉毒素污染风险，保障了人民群众的饮食安全。

二、黄曲霉毒素检测方法

(1)黄曲霉毒素检测方法中，高效液相色谱法（HPLC）因其高灵敏度和准确性，被广泛应用于食品安全检测中。HPLC检测黄曲霉毒素B1（AFB1）通常结合荧光检测器，检测限可达0.1微克/千克。例如，美国食品药品监督管理局（FDA）规定，玉米和玉米制品中AFB1的限量为20微克/千克。在实际检测中，如2019年某地粮食抽检中，HPLC检测发现某品牌玉米片AFB1含量超标，经溯源发现，该批次玉米在储存过程中受到黄曲霉污染。

(2)酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种快速、简便的黄曲霉毒素检测方法，广泛应用于现场快速筛查。ELISA检测AFB1的灵敏度可达0.5微克/千克，具有操作简便、成本低廉等特点。例如，2020年某食品安全检测机构使用ELISA方法对一批花生酱进行检测，结果显示AFB1含量超过0.5微克/千克，随后采用HPLC进行确证，确认花生酱受到黄曲霉毒素污染。

(3)聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR（qPCR）是分子生物学检测方法，具有极高的灵敏度和特异性，适用于黄曲霉毒素的痕量检测。qPCR检测AFB1的灵敏度可达0.01微克/千克，可实现对食品中黄曲霉毒素的早期预警。例如，2021年某地区粮食抽样检测中，qPCR检测发现某批次大米AFB1含量超过0.01微克/千克，立即启动应急预案，防止污染食品流入市场。此外，PCR和qPCR方法还可用于黄曲霉毒素基因检测，为食品安全监管提供有力支持。

三、黄曲霉毒素检测步骤

(1)黄曲霉毒素检测步骤通常包括样品制备、提取、净化和检测分析。首先，从被检样品中准确称取一定量的样品，如粮食、油料或坚果等。根据样品类型，采用不同的前处理方法，如粉碎、研磨、均质等。样品处理过程中，需注意避免污染和交叉污染。例如，在检测某批花生中AFB1含量时，先从样品中称取10克，经研磨均质后，用于后续提取。

(2)提取过程旨在从样品中释放黄曲霉毒素。常用的提取溶剂有乙腈、甲醇、丙酮等。提取过程中，需严格控制提取温度、时间和溶剂比例。提取后的样品通过离心分离，取上清液进行净化。净化步骤通常包括液-液分配、固相萃取（SPE）或柱层析等，以去除杂质，提高检测灵敏度。例如，在检测玉米中AFB1时，采用乙腈提取，通过SPE小柱净化，提取效率可达95%以上。

(3)检测分析阶段，根据所选方法进行。如采用HPLC检测，需将净化后的样品进行衍生化处理，以增加检测灵敏度。将衍生化后的样品注入HPLC仪器，通过色谱柱分离，利用荧光检测器检测。根据标准曲线计算AFB1含量。例如，在某次检测中，样品经过HPLC检测，AFB1含量为20微克/千克，符合国家标准。此外，实时荧光定量PCR（qPCR）检测过程中，需将提取的DNA进行PCR扩增，利用荧光定量仪分析扩增曲线，得出AFB1的绝对含量。如某批次花生米qPCR检测结果显示AFB1含量为0.03微克/千克，远低于国家标准，表明该批次花生米未受黄曲霉毒素污染。