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高效液相色谱快速测定玉米中黄曲霉毒素的研究_罗小虎

一、引言

(1)黄曲霉毒素是一类广泛存在于霉变谷物、坚果等食品中的真菌毒素，其具有较强的毒性和致癌性，对人类健康构成严重威胁。玉米作为一种重要的粮食作物，在储存和加工过程中容易受到黄曲霉毒素的污染。因此，建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对于保障玉米及其制品的安全具有重要意义。

(2)高效液相色谱（HPLC）作为一种高效、灵敏的分析技术，已被广泛应用于食品中黄曲霉毒素的检测。近年来，随着色谱分离技术和检测技术的不断发展，HPLC在黄曲霉毒素检测中的应用越来越广泛。本研究旨在建立一种基于高效液相色谱的快速测定玉米中黄曲霉毒素的方法，以提高检测效率和准确性。

(3)本研究采用高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）技术，结合适当的样品前处理方法，对玉米样品中的黄曲霉毒素进行定量分析。通过优化色谱条件、流动相组成和检测波长等参数，实现了对玉米样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的快速、准确检测。该方法具有操作简便、灵敏度高、检测限低等优点，为玉米及其制品中黄曲霉毒素的快速检测提供了有力技术支持。

二、实验部分

(1)实验样品采集自不同产地和不同储存条件的玉米，共计30个样品。每个样品的重量约为100g，分别编号为1至30号。样品在采集后立即置于-20℃的冰箱中保存，以防止黄曲霉毒素的降解。

(2)样品前处理采用酶解法，具体步骤如下：首先，将玉米样品研磨成粉末，过筛后取适量粉末加入酶解液（pH6.0的磷酸盐缓冲液），在60℃下酶解2小时。酶解完成后，加入适量的正己烷进行液-液萃取，以去除杂质。萃取后的上层有机相在氮气下浓缩至近干，用流动相复溶于适当体积的溶液中，过0.22μm滤膜，供高效液相色谱分析。

(3)高效液相色谱分析采用Agilent1260Infinity高效液相色谱仪，配备荧光检测器。色谱柱为C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（体积比80:20），流速为1.0mL/min，柱温为30℃。荧光检测器的激发波长为365nm，发射波长为430nm。样品进样量为20μL。通过对比标准曲线和样品色谱图，对玉米样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2进行定量分析。实验过程中，对每个样品进行3次重复测定，以确保结果的准确性和可靠性。以玉米样品1为例，其黄曲霉毒素B1的浓度为5.2ng/g，黄曲霉毒素B2的浓度为3.8ng/g，黄曲霉毒素G1的浓度为4.5ng/g，黄曲霉毒素G2的浓度为2.1ng/g。

三、结果与讨论

(1)本研究建立的高效液相色谱法对玉米中黄曲霉毒素的检测结果显示，该方法具有较好的线性范围和良好的重复性。以黄曲霉毒素B1为例，其线性范围为0.5～50ng/mL，相关系数为0.999。在低浓度范围内，该方法对黄曲霉毒素B1的检测限为0.5ng/g，灵敏度较高。通过对30个玉米样品的检测，结果显示，该方法对黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的回收率分别为98.5%、96.2%、99.0%和97.8%，相对标准偏差分别为2.5%、3.1%、2.8%和3.2%，表明该方法具有良好的准确性和可靠性。

(2)实验过程中，通过优化色谱条件，如流动相组成、流速和柱温等，提高了检测灵敏度和分离效果。例如，将流动相比例调整为乙腈-水（体积比80:20）时，黄曲霉毒素B1的峰面积较原先提高了20%。此外，通过优化检测波长，将激发波长调整为365nm，发射波长调整为430nm，黄曲霉毒素B1的检测灵敏度提高了15%。以玉米样品15为例，采用优化后的色谱条件，其黄曲霉毒素B1的检测限从原先的1.0ng/g降至0.85ng/g。

(3)本研究建立的黄曲霉毒素检测方法在实际应用中表现出良好的效果。例如，在某玉米加工企业对玉米原料进行检测时，采用该方法检测到3个样品中黄曲霉毒素B1含量超过限量标准，分别为10.5ng/g、11.2ng/g和12.8ng/g。根据检测结果，企业及时采取了去霉处理措施，确保了玉米制品的安全。此外，该方法在食品安全监管、玉米产品出口等方面具有广泛的应用前景。

四、结论

(1)本研究成功建立了高效液相色谱法快速测定玉米中黄曲霉毒素的方法，该方法操作简便、灵敏度高、准确性和可靠性良好。通过对30个玉米样品的检测，结果显示该方法在黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检测中均表现出优异的性能。

(2)本研究建立的黄曲霉毒素检测方法在实际应用中具有显著优势，能够有效提高食品安全监管和玉米产品质量控制效率。该方法为玉米及其制品中黄曲霉毒素的快速检测提供了有力技术支持，有助于保障公众健康。

(3)未来，我们将进一步优化该方法，提高检测灵敏度和选择性，使其更适用于复杂样品中黄曲霉毒素的检测。同时，我们将研究该方法在其他粮食