模块四逆境胁迫对植物生理生化指标的.ppt

实验方法I种子发芽率的测定：各取50粒吸胀的玉米种子或小麦种子→沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒），进行下列实验：其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴20min）另50个半粒进行曙红染色（室温染色10min）→洗净后观察根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。第14页,共22页，星期六，2024年，5月品种为晴3或鲁玉13的玉米种子或小麦种子（购于西山种子公司）→用0.1%HgCl2消毒10min后→用蒸馏水漂洗干净→用蒸馏水于26℃下吸涨12h→播于垫有6层湿润滤纸的带盖白磁盘（24cm×16cm）中→于26℃下暗萌发60h→计算发芽率（注意与前面结果比较）→选取长势一致的玉米幼苗做干旱5天、高温、盐渍或低温下处理（去除较矮或较高的玉米幼苗）。实验方法I第15页,共22页，星期六，2024年，5月呼吸作用的测定：材料的准备：将预测量的材料称重后（0.5g）放入测量瓶。测定方法：打开电源预热5min→打开气泵开关→打开闭路开关→用碱石灰管分别连接面板上的“OUT”和“IN”，主机的“OUT1”和“IN1”分别与测量瓶的“OUT1”和“IN1”相连→立即开始记时→测量1min的CO2增加量计算：每分钟每克材料的CO2释放量（mL.g-1.min-1）。实验方法II第16页,共22页，星期六，2024年，5月Pro的提取：分别取0.1g实验组和对照组的幼苗→加入3mL3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2mL3%SSA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。测定：上清液各2mL→分别加入(2mL冰乙酸和2mL茚三酮试剂)→煮沸15min→冷却后→5000rpm离心10min（若没沉淀可略此步骤）→分别测定A520计算：Procontent=(mmol.g-1FW)实验方法III第17页,共22页，星期六，2024年，5月MDA提取：分别取0.1g实验组和对照组→加入3mL0.1%TCA和少许石英砂→充分研磨→用2mL0.1%TCA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。测定：分别取上清液各1mL→加入0.6%TBA（用10%TCA配制）3mL→煮沸15min→冷却后→5000rpm离心5min（视沉淀有无）→分别测定OD450和OD532计算：实验方法IV第18页,共22页，星期六，2024年，5月H2O2提取：分别取0.1g实验组和对照组→加入3mL0.3%三氯乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2mLTCA洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积。测定：分别取上清液各4mL→加入0.1%Ti(SO4)2[用20%(v/v)H2SO4配制]0.2mL→摇匀→OD410计算：H2O2content=(mmol.g-1FW)实验方法V第19页,共22页，星期六，2024年，5月实验方法VI1、抗氧化酶的提取：分别取0.1g实验材料→加入少许石英砂和3ml提取液（50mmol/LPBS,pH6.0,内含0.１mmol/LEDTA,1%PVP）→充分研磨→转入离心管中→用2ml提取液洗研钵→5000rpm离心10min→量上清液体积→用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃保存。第20页,共22页，星期六，2024年，5月2、POD测定：取POD反应混合液（10mmol/L愈创木酚，5mmol/LH2O2,用PBS溶解）2.95ml，加入酶液50ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应2min时的A470。3、PPO测定：取PPO反应混合液（20mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）2.9ml，加入酶液0.1ml（空白调零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应2min时的A410。以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U），则：实验方法VI第21页,共22页，星期六，2024年，5月PODactivities=(mmol.g-1FWmin-1)PPOactivities=(U.g-1FW)4、计算实验方法VI第22页,共22页，星期六，2024年，5月目的掌握逆境胁迫下一些植物生理指标的测定方法；了解逆境胁