《戴安HPLC基础知识》课件.pptVIP

*******************戴安HPLC基础知识HPLC技术的基本原理流动相HPLC中，流动相是一种液体，它通过色谱柱将样品带走。固定相固定相是一种固体或涂覆在固体上的液体，它固定在色谱柱中，并与样品发生相互作用。分离原理HPLC分离原理是基于样品中不同组分与流动相和固定相之间相互作用力的差异。HPLC的基本组成泵提供恒定的压力推动流动相通过色谱柱。进样器将样品精确地注入流动相中。色谱柱分离样品中不同组分的核心部件。检测器检测流出液中各组分的浓度。流动相的选择溶剂性质极性、粘度、挥发性、紫外吸收等样品性质极性、溶解度、稳定性等色谱柱填料类型、粒径、孔径等色谱柱的选择固定相类型反相色谱柱是最常用的类型，适合分离极性较小的化合物。正相色谱柱则适合分离极性较大的化合物。柱长和内径柱长和内径会影响分离效率和分析时间。较长的色谱柱可以提供更好的分离效果，但分析时间也会更长。颗粒尺寸颗粒尺寸越小，分离效率越高，但流动相压力也会更高。填料类型填料类型会影响分离选择性和分离效率。不同的填料可以提供不同的分离效果。样品前处理技术1去除干扰物质样品中存在多种杂质，这些杂质会干扰分析结果的准确性和可靠性。2提高样品浓度有些样品中目标物质的浓度较低，需要进行浓缩处理。3改善样品性质一些样品可能不适合直接进样，需要进行前处理以改变其性质。样品进样方法手动进样手动进样需要使用注射器将样品注入进样阀。自动进样自动进样器可以自动完成样品进样，提高进样效率和重复性。自动进样器的工作原理1样品瓶样品瓶中的样品。2进样针吸取样品并将其注入色谱柱。3进样阀控制样品进入色谱柱的流量。4控制系统控制自动进样器的工作流程。自动进样器是一种自动化进样装置，它可以将样品自动注入色谱柱，简化了实验操作，提高了实验效率。色谱检测器的类型紫外可见检测器基于物质对特定波长紫外可见光的吸收特性进行检测。荧光检测器利用物质在特定波长光激发下产生的荧光进行检测。电化学检测器测量物质在电极表面的氧化还原反应电流变化进行检测。质谱检测器通过测量物质的离子碎片信息进行检测，可提供物质的结构信息。紫外可见检测器的结构和工作原理1光源氘灯或钨灯，提供紫外可见光2单色器将光源发出的混合光分离成单色光3流通池样品溶液流经的区域，吸收单色光4检测器测量通过流通池后的光强，并将其转换为电信号5信号处理电信号被放大并处理，得到色谱图荧光检测器的结构和工作原理1激发光源提供特定波长的紫外光照射样品2样品池盛放待测样品，使样品受到激发光照射3发射光检测器检测样品发射的荧光，并将其转换为电信号电化学检测器的结构和工作原理工作原理电化学检测器利用电化学反应来检测分析物，并生成电信号。结构组成主要包括工作电极、参比电极、辅助电极和电解液。检测方式常见的检测方式包括安培法、库仑法和伏安法。应用领域广泛应用于药物分析、食品分析、环境监测等领域。质谱检测器的结构和工作原理1离子化将样品分子转化为带电离子2质量分析根据离子质量电荷比分离离子3检测检测分离后的离子并记录其丰度色谱保留时间的影响因素色谱柱色谱柱的类型、长度和填料性质都会影响保留时间。例如，使用更长的色谱柱或填料颗粒更小的色谱柱，将延长保留时间。流动相流动相的组成、pH值、极性和温度都会影响保留时间。例如，增加流动相的极性将缩短保留时间。温度温度升高通常会降低保留时间，因为温度升高会导致溶质在流动相中的溶解度增加，并加速扩散速率。色谱峰形的影响因素进样技术进样体积过大，会导致峰展宽。色谱柱柱效低或填料不均匀，会导致峰拖尾或前沿。流动相流动相流速过快或过慢，会导致峰展宽或拖尾。色谱分离度的计算方法1基线宽度峰的基线宽度是指峰底部的宽度，通常用W表示。2保留时间保留时间是指样品从进样到检测器的时间，通常用tR表示。3分离度分离度是指两个峰之间的距离，通常用Rs表示。样品的定性分析1保留时间确定样品中各组分的保留时间，并与标准物质的保留时间进行比对。2色谱峰形观察色谱峰的形状、对称性以及峰面积等特征，判断样品组分的纯度和峰形是否符合要求。3光谱信息通过紫外可见、荧光等检测器获得样品组分的光谱信息，进行定性分析。样品的定量分析校正曲线通过绘制标准溶液浓度与峰面积或峰高之间的关系曲线，建立定量分析基础。未知样品浓度根据未知样品的峰面积或峰高，利用校正曲线进行外标法定量分析。定量结果定量结果需要考虑方法的精密度和准确度，并进