清单04 PCR 专题 一案搞定PCR-备战2025年高考生物二轮热点背练清单（新高考通用）（原卷版）.docx

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清单04PCR专题一次搞定PCR

1.【PCR基因定点突变】重叠延伸PCR

有个地方不清楚可沿引物3引物43′端延伸

我直接拿手写这样方便大家熟悉这个过程，以免高考题出信息情境题，所以这个方法还是要了解一下流程。

2.(实时)荧光定量PCR技术

先从样本中提取RNA，RNA中可能有新冠病毒的RNA，同时也存在很多采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的RNA。通过逆转录酶将样本的RNA逆转录为cDNA，并进行PCR扩增，在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；若反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小(如图)。

3.RT-PCR技术

如果想克隆一段已知mRNA序列的cDNA，可使用反转录酶PCR（reversetranscrip1asePCR，RT-PCR）技术。RT-PCR与刚才介绍的PCR技术的主要区别在于它是从mRNA而不是双链DNA开始的。先利用反向引物在反转录酶催化下将mRNA反转录成单链DNA；DNA-RNA杂交链变性后，再用正向引物将单链DNA转换成双链DNA；接着在DNA聚合酶催化下，正向引物起始cDNA第二链合成，将单链DNA转换成双链DNA；最后用常规PCR技术扩增足量的cDNA用于克隆。

一、单选题

1．（24-25高三上·天津·阶段练习）某种二倍体植物的P1和P2植株杂交得F1，F1自交得F2。对不同个体的DNA进行PCR检测，产物的电泳结果如图所示，其中①～⑧为部分F2个体，上部两条带是一对等位基因的扩增产物，下部两条带是另一对等位基因的扩增产物，这两对等位基因位于非同源染色体上。下列相关叙述错误的是（????）

A．①②个体均为杂合体，F2中③所占比例大于⑤

B．还有一种F2个体的PCR产物电泳结果有三条带

C．①自交子代的PCR产物电泳结果有1/2与④电泳结果相同

D．③和⑦杂交子代的PCR产物电泳结果与②⑧电泳结果相同

2．（24-25高三上·湖北·期中）图1是某单基因遗传病的遗传系谱图，该病在人群中的发病率为1/8100。科研人员提取了四名女性的DNA，用PCR扩增了与此病相关的基因片段，并对产物酶切后进行电泳（正常基因含有一个限制酶切位点，突变基因增加了一个酶切位点），结果如图2。相关叙述正确的是（????）

A．该病的遗传方式可能为伴X染色体隐性遗传

B．Ⅱ-1与Ⅱ-2婚配生一个患病男孩的概率为1/91

C．该突变基因新增的酶切位点可能位于310bp或118bp中

D．扩增Ⅱ-2与此病相关的基因片段，酶切后电泳将产生3种条带

3．（23-24高三上·浙江·阶段练习）实时荧光定量逆转录PCR（qRT-PCR）是指先逆转录得到DNA，然后进行PCR扩增。加入的Taqman荧光探针与模板DNA的某条链互补结合，每复制一次，就有一个荧光分子生成，当荧光强度达到一定程度就可以被仪器检测到，原理如图所示。下列叙述错误的是（????）

（注：Ct值是指PCR扩增过程中，缓冲液中的荧光强度首次超过设定阈值时，PCR反应所需的循环数。）

A．图中的TaqDNA聚合酶具有5′外切酶活性

B．荧光报告基团连接在Taqman探针的5′端

C．该PCR过程只需要加入1种足量的引物

D．Ct值越小，说明体系中目标RNA越多

4．（22-23高三下·河南焦作·阶段练习）RT-PCR是将RNA逆转录（RT）成cDNA（与mRNA互补的DNA单链）和聚合酶链式反应（PCR）相结合的技术，具体过程如图所示，下列叙述正确的是（????）

??

A．过程Ⅰ获得cDNA的过程与DNA复制过程中存在的碱基配对方式相同

B．图中A、B两种引物的核苷酸序列不同，但参与子链合成的酶均相同

C．图中子链的合成均是以四种核糖核苷酸为原料从引物的一端开始的

D．过程Ⅱ中，若进行6轮循环，则共需要加入引物的数量为63个

二、多选题

5．（24-25高三上·湖北·阶段练习）某科研小组利用PCR定点突变技术培育抗冻番茄新品种。设计含有非特异性碱基配对的引物，将突变位点引入编码抗冻蛋白的基因中，获得抗冻能力更强的突变基因。下列叙述正确的是（）

??

A．过程②还需要四种脱氧核苷酸和耐高温的DNA连接酶

B．过程③至少需要进行2次循环才能得