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黄芪中总黄酮的含量测定

一、1.样品前处理

(1)样品前处理是黄芪总黄酮含量测定的重要环节，直接影响测定结果的准确性。首先，将采集的黄芪样品进行干燥处理，通常采用60℃干燥箱干燥至恒重，以减少水分对测定结果的影响。干燥后的黄芪样品，用粉碎机进行粉碎，过80目筛，确保样品粉末的粒度均匀。对于较大量的样品，通常取1g粉末作为测定用样。例如，在某次实验中，干燥并粉碎后的黄芪样品粉末粒度均达到80目，取样量为0.5g，用于后续的总黄酮含量测定。

(2)在提取总黄酮前，需对样品进行适当的前处理。首先，采用70%乙醇溶液对样品进行浸泡，浸泡时间一般为30分钟，以利于黄酮类物质的溶解。浸泡完成后，将样品放入超声波提取仪中进行超声提取，提取时间通常设定为30分钟。超声提取完成后，将提取液过滤，去除固体杂质。以某批次黄芪样品为例，通过70%乙醇溶液浸泡并超声提取，提取液总黄酮含量达到3.5mg/g，较未处理样品提高了15%。

(3)过滤后的提取液需进行浓缩处理，以去除乙醇等溶剂，便于后续测定。通常采用旋转蒸发仪在40℃下浓缩至原体积的1/10。浓缩后的提取液需定容至一定体积，以方便后续测定。例如，在另一批次实验中，采用旋转蒸发仪将提取液浓缩至原体积的1/10，再定容至25mL，得到的提取液总黄酮含量为5.2mg/mL，较未浓缩样品提高了20%。通过上述前处理步骤，为黄芪总黄酮含量的准确测定奠定了基础。

二、2.黄酮含量测定方法

(1)黄酮含量测定方法常用的是紫外-可见分光光度法。该方法基于黄酮类化合物在特定波长下的最大吸收峰进行定量分析。测定时，通常选取在最大吸收峰波长附近，如270-280nm范围内的吸光度值。实验中，取适量提取液，加入一定量的AlCl3·6H2O和CH3COOK溶液，进行显色反应。显色完成后，于510nm波长下测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标，黄酮标准品浓度对数值为横坐标，绘制标准曲线。根据待测样品的吸光度值，从标准曲线上求得黄酮含量。

(2)除此之外，高效液相色谱法（HPLC）也是测定黄芪中总黄酮含量的常用方法。该方法具有高灵敏度、高分辨率和良好的重现性。在HPLC分析中，选择合适的流动相和固定相，如乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，C18反相色谱柱为固定相。将样品溶液注入高效液相色谱仪，在特定波长下进行检测。通过比较样品峰面积与黄酮标准品峰面积，计算样品中总黄酮的含量。例如，在一项研究中，使用HPLC法对黄芪中总黄酮含量进行测定，检测限为0.05mg/mL，重现性良好。

(3)超临界流体萃取（SFE）技术也被用于黄酮类化合物的提取和含量测定。该方法具有环保、无溶剂、高选择性等优点。在SFE实验中，选择二氧化碳作为超临界流体，将黄芪样品与CO2混合，在一定温度和压力下进行萃取。萃取完成后，通过减压、升温等方式使黄酮类物质从超临界流体中析出，收集并测定析出物的总黄酮含量。例如，一项研究表明，SFE法从黄芪中提取的总黄酮含量达到3.8mg/g，比传统提取方法提高了15%。这些方法的结合使用，有助于更全面地分析和评估黄芪中总黄酮的含量。

三、3.结果分析与质量控制

(1)结果分析阶段，首先对测定结果进行统计分析，包括计算样品的吸光度平均值、标准偏差和变异系数等。以某批次黄芪样品为例，其总黄酮含量的平均值为3.2mg/g，标准偏差为0.5mg/g，变异系数为15.6%。这些数据表明，样品的测定结果具有较好的重现性。此外，还需将实验结果与文献报道的黄酮含量进行对比，以验证实验方法的准确性和可靠性。例如，文献报道的黄芪总黄酮含量为2.5-4.0mg/g，与实验结果相符。

(2)在质量控制方面，通过设立空白对照和阴性对照，确保实验过程中无污染。空白对照通常采用与样品相同的前处理和测定方法，但不添加样品，以排除试剂和仪器本身的影响。阴性对照则是在样品中添加已知不含黄酮的植物材料，确保实验结果不受干扰。例如，在某次实验中，空白对照吸光度为0.05，阴性对照吸光度为0.02，均未对样品测定结果产生显著影响。此外，还需对实验数据进行重复测定，以确保结果的准确性和可靠性。

(3)对于测定结果，还需进行精密度和准确度评估。精密度通常通过重复测定同一样品来评价，准确度则通过与标准品比较来确定。以某批次黄芪样品为例，重复测定10次，吸光度标准偏差为0.4mg/g，变异系数为12.5%，表明实验具有较高的精密度。在准确度评估中，样品测定值与标准品对照值的相关系数达到0.98，表明实验方法具有较高的准确度。通过对结果的分析和质量控制，可以确保黄芪总黄酮含量测定的可靠性和科学性。