黄酮类化合物的提取分离技术第四章讲解.pptx

黄酮类化合物的提取分离技术主讲人：赵卫峰广西卫生职业技术学院药学院—第四章—

第三节黄酮类化合物的提取分离

一、黄酮类化合物的提取二、黄酮类化合物的分离

酮羰基黄酮类化合物的提取分离黄色掌握各溶剂提取的原理和方法、PH梯度萃取法、聚酰胺柱色谱分离的原理和方法熟悉硅胶柱色谱分离的原理和方法了解溶剂萃取法、葡聚糖凝胶柱色谱分离方法和原理学习要求

一、黄酮类化合物的提取溶剂提取法根据黄酮类化合物的存在状态及其溶解性选择合适的溶剂和方法存在状态提取溶剂提取方法苷元（木质部）一般苷元多甲氧基苷元苷（花、叶、果实一般苷多糖苷乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醚、乙醇、甲醇苯甲醇、乙醇、乙酸乙酯、甲醇：水（1:1）热水（如芸香苷）回流提取、渗漉法、连续回流提取煎煮、回流、渗漉、连续回流提取（注意苷酶解）

一、黄酮类化合物的提取溶剂提取法常用提取溶剂方法溶剂适合成分特点及注意事项醇类溶剂提取法90-95%乙醇苷元60%左右乙醇苷最常用于提取的有机溶剂。合适很多成分提取（冷浸、渗滤、回流）碱溶酸沉淀法（广泛应用）（1）碱水：饱和石灰水、5%碳酸钠、稀氢氧化钠溶液（2）碱性乙醇液含酚羟基，具有酸性①花果类药材适合用石灰乳。②碱浓度不宜过高，酸性也不能太强热水提取法沸水（破坏酶的活性）黄酮苷类含量较高成本低，安全，设备简单，适合工业生产。蛋白质、粘液质等杂质多，后续分离困难如黄芩中黄芩苷、淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿次苷的提取如槐花米中芸香苷的提取橙皮苷---50-60%乙醇渗漉葛根总黄酮用95%的乙醇或甲醇冷浸

一、黄酮类化合物的提取溶剂提取法槐米中芸香苷提取实例槐米粗粉0.4%硼砂水溶液，石灰乳调PH8-9，保持微沸20′，反复2次药渣滤液浓盐酸调PH3-4，静置，过滤沉淀（芸香苷）滤液芸香苷

二、黄酮类化合物的分离（一）溶剂萃取法（三）柱色谱法根据极性差异、酸性强弱、分子量大小、及有无特殊结构，常用的分离方法有三种（二）PH梯度萃取法

二、黄酮类化合物的分离（一）溶剂萃取法系统溶剂萃取法水提取液（或醇提取浓缩液）依次用极性有小到大的溶剂分别萃取石油醚乙醚乙酸乙酯水饱和正丁醇母液脂溶性杂质苷元单糖苷多糖苷水溶性杂质水或不同浓度的醇溶液提取后，可以选用不同极性的溶剂分别萃取，分离黄酮苷元和苷或者其他极性大小不同的黄酮类化合物。

二、黄酮类化合物的分离（二）PH梯度萃取法适用于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离乙醚液5%NaHCO3萃取碱水层乙醚层酸化，静置，过滤7,4′-二羟基黄酮5%Na2CO3溶液萃取碱水层酸化，过滤7或4′-羟基黄酮乙醚层0.2%NaOH溶液萃取乙醚层碱水层一般酚羟基4%NaOH溶液萃取酸化，过滤5-羟基黄酮

2、聚酰胺柱色谱1、硅胶柱色谱3、葡聚糖凝胶柱色谱根据固定相的选择不同，常用的柱色谱分离法分为3种方法二、黄酮类化合物的分离（三）柱色谱法

二、黄酮类化合物的分离（三）柱色谱法1、硅胶柱色谱方法分离成分流动相硅胶分配柱色谱硅胶吸附柱色谱游离的二氢黄酮（醇）、异黄酮、高度甲基化的黄酮及黄酮醇黄酮苷类成分三氯甲烷-甲醇混合溶剂三氯甲烷-甲醇-水，乙酸乙酯-丙酮-水成分流出顺序：极性小→极性大

二、黄酮类化合物的分离（三）柱色谱法2、聚酰胺柱色谱吸附原理：氢键吸附，适合分离黄酮类化合物分离特点：分离效果好，分离容量大，适合制备性分离影响因素：化合物的分子结构、溶剂的种类和极性

（三）柱色谱法2、聚酰胺柱色谱不同黄酮类化合物在聚酰胺柱子上被吸附的规律如下：①糖基的影响：苷元相同，糖基越多，被吸附力越弱，洗脱速度越快②酚羟基数目：酚羟基数目越多，被吸附力越强，洗脱速度越慢③酚羟基位置：酚羟基数目相同，能形成分子内氢键，被吸附力下降，洗脱速度加快④芳香核、共轭双键：芳香核、共轭双键越多，被吸附力越强，洗脱速度越慢⑤不同的黄酮类化合物：被吸附力强弱的顺序为：黄酮醇＞黄酮＞二氢黄酮＞异黄酮

（三）柱色谱法2、聚酰胺柱色谱流动相选择：分离黄酮苷：不同浓度的甲醇或乙醇梯度洗脱分离黄酮苷元：三氯甲烷-甲醇-丁酮-丙酮；苯-石油醚-丁酮-甲醇

（三）柱色谱法3、葡聚糖凝胶色谱凝胶类型：SephadexG型（葡聚糖凝胶）SephadexLH-20型(羟丙基葡聚糖凝胶)分离原理：分离黄酮苷时，分子筛起主导作用，按分子量由大到小的顺序依次被洗脱分离黄酮苷元时，吸附起主导作用，酚羟基数目越多，越难洗脱流动相：①碱性水溶液：0.1mol/L的NH4OH②含盐水溶液：0.5mol/LNaCl溶液③醇及含水醇：甲醇-水、乙醇④其他溶剂：甲醇-三氯甲烷

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