清单10 基因工程与育种电泳PCR原理依据相结合-备战2025年高考生物二轮热点背练清单（新高考通用）（解析版）.docx

试卷第=page11页，共=sectionpages33页

试卷第=page11页，共=sectionpages33页

10.基因工程与育种电泳PCR原理依据相结合

本专题大家根据提纲做后面的练习题，目的是对相关技术和原理熟悉，灵活应用相关原理并解决实际问题。

一、基因工程与育种基础

1.基因工程操作技术

限制酶的作用及酶切位点分析（如R?、R?双酶切载体）

重组质粒的构建与验证（电泳检测、抗生素筛选）

目的基因的克隆与表达（启动子、终止子的功能）

2.育种技术应用

转基因抗虫作物的培育（如Bt基因导入）

多囊卵巢综合征等疾病模型的基因调控机制

环境DNA（eDNA）技术在种群监测中的应用

二、电泳技术原理与应用

1.琼脂糖凝胶电泳

电泳原理：带电分子在电场中的迁移规律

电泳结果分析（条带长度与DNA片段大小的关系）

应用案例：验证重组质粒构建、检测酶切产物

2.限制性酶切图谱分析

单酶切与双酶切策略

电泳图谱判断载体类型（环状/线状DNA）

结合PCR产物的电泳验证（如基因敲除检测）

三、PCR技术原理与实验设计

1.PCR扩增基础

引物设计原则（互补性、方向性）

PCR循环步骤（变性、退火、延伸）

应用场景：目的基因扩增、突变位点引入

2.PCR技术的拓展应用

逆转录PCR（RTPCR）获取cDNA

荧光定量PCR（qPCR）检测基因表达量

定点突变技术（如无缝克隆InFusion技术）

四、综合实验设计与分析

1.基因工程与电泳结合案例

重组质粒的酶切验证（如HindⅢ、BamHⅠ双酶切）

基因表达载体构建中的电泳筛选（如抗性标记分析）

2.PCR与电泳联合应用

突变基因的检测（如基因D的碱基缺失分析）

转基因植株的基因型鉴定（电泳条带解读）

3.复杂实验设计

光控基因表达系统的构建（如蓝光诱导的酪氨酸酶表达）

双特异性抗体的开发（CD3与CD87结合位点设计）

电泳结果判断（如限制酶切位点间距计算）

PCR产物分析（引物设计错误的影响）

基因表达载体的构建逻辑（启动子选择、标记基因功能）

基因功能验证实验（如荔枝核皂苷降糖机制）

生态位分化的研究（红外相机监测动物活动节律）

基因编辑技术（CRISPR/Cas9）的应用与评价

结合遗传规律与分子生物学技术（如基因型表型关联分析）

实验设计的科学性与可操作性（如对照组设置、变量控制）

一、单选题

1．（23-24高二下·广东中山·期末）在基因工程操作中，科研人员利用识别两种不同序列的限制酶(R?和R?)处理基因表达载体，进行琼脂糖凝胶电泳检测，结果如下图所示。以下相关叙述错误的是（????）

A．电泳是带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。本实验中，带电分子会向着电荷相反的电极移动

B．该载体最可能是环状DNA，两种限制酶在载体上各有一个酶切位点

C．限制酶R?和R?的酶切位点最短相距约200bp，最长相距约600bp

D．需将扩增得到的PCR产物与内含指示剂的电泳缓冲液混合后加样

【答案】D

【分析】切割DNA的工具是限制酶，它们能够识别双链DNA分子的某种特定脱氧核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

【详解】A、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程，由于同性相斥、异性相吸，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动，A正确；

B、由题可知，当仅用一种限制酶切割载体时，这两种限制酶切割产生的DNA片段等长，只有1条片段，故该载体最可能是环状DNA，两种限制酶同时切割时则产生两种长度的DNA片段，所以两种限制酶在载体上各有一个酶切位点，B正确；

C、由题知，两种限制酶同时切割时则产生600bp和200bp两种长度的DNA片段，所以两种限制酶的酶切位点最短相距约200bp，最长相距约600bp，C正确；

D、将扩增得到的PCR产物与内含指示剂的凝胶载样缓冲液混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入加样孔，D错误。

故选D。

2．（2025·湖南永州·二模）每年5至9月，中华鲟能在长江口完成淡海水转换，进入海洋环境。根据其生活史特征和洄游习性，要全面覆盖标记追踪很困难。eDNA（环境DNA）技术是指从环境中提取生物残留的DNA片段，通过PCR扩增后经DNA测序等检测目