2024_2025学年高中生物专题5课题1DNA的粗提取与鉴定教学案含解析新人教版选修1.docVIP

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DNA的粗提取与鉴定

1.DNA在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低。2．DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可利用酒精将DNA和蛋白质分开。

1.DNA在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低。

2．DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可利用酒精将DNA和蛋白质分开。

3．DNA对蛋白酶、高温柔洗涤剂有耐受性。

4．在加热条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

5．哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，不能作为提取DNA的试验材料。若选取肝脏细胞或植物细胞，则必需充分研磨。

6．鸡血中加入柠檬酸钠可防止血液凝固。

7．用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓且沿同一个方向进行，以免加剧DNA分子的断裂。

一、试验原理

1．提取思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。

2．提取原理

(1)DNA的溶解性：

①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分别的目的。

②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可溶于其中。

(2)DNA对酶、高温柔洗涤剂的耐受性：

①蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。

②大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，发生变性，而DNA在80_℃以上才会变性。

③洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。

3．鉴定原理：DNA＋二苯胺沸水浴,蓝色。

二、试验操作

1．试验材料的选取

选用DNA含量相对较高的生物组织，胜利的可能性更大。

2．裂开细胞，获得含DNA的滤液

(1)动物细胞的裂开(以鸡血为例)：在鸡血细胞液中加入肯定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。

(2)植物细胞的裂开(以洋葱为例)：先将洋葱切碎，然后加入肯定的洗涤剂和食盐，进行充分地搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

3．去除滤液中的杂质

(1)方案一：通过限制NaCl溶液的浓度去除杂质。

(2)方案二：干脆在滤液中加入嫩肉粉，反应10～15min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。

(3)方案三：将滤液放在60～75_℃的恒温水浴箱中保温10～15min，使蛋白质变性而与DNA分别。

4．DNA的析出

在滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物。

5．DNA的鉴定

将呈白色丝状的DNA溶解于5mL物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液中，再加入4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min，冷却后视察溶液的颜色，留意要同时设置比照试验。

三、操作提示

1．以血液为试验材料时，每100mL血液中须要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。

2．加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔软，否则简单产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。

3．鉴定DNA用的二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。

1．下图中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度之间关系的是()

解析：选CDNA在NaCl溶液中的溶解度随着NaCl溶液浓度的变更而变更，在NaCl溶液浓度为0.14mol/L时DNA溶解度最小。

2.在DNA粗提取与鉴定试验中，除去杂质时将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15min的目的是()

A．使DNA变性

B．使蛋白质变性

C．使DNA和蛋白质变性

D．分解蛋白质

解析：选B大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15min，目的是使蛋白质变性，然后分别得到DNA。

3．在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是()

A．防止凝血B．加快DNA析出

C．加快DNA溶解D．加速凝血

解析：选A柠檬酸钠是抗凝血物质，防止凝血，有利于鸡血细胞液的制备。

eq\a\vs4\al(核心要点?一?)eq\b\lc\|\rc\(\a\vs4\al\co1(,,,,))eq\a\vs4\al(DNA粗提取与鉴定的原理和方法)

1．DNA与蛋白质在NaCl溶液中的溶解度

项目

溶解规律

2mol/L的NaCl溶液

0.14mol/L的NaCl溶液

DNA

溶解

析出

蛋白质

部分发生盐析沉淀

溶解

总结

①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；②选择适当的盐溶液就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分别目的

[名师点拨]高温柔盐溶液对DNA和蛋白质的影响不同

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