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蜜蜂人工授精技术操作规程

1范围

本文件对蜜蜂人工授精的术语和定义、操作前的准备、采精、授精、授精后的管理、档案记录等作了具体规定。

本文件适用于东方蜜蜂和西方蜜蜂人工授精。2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

父群paternalcolony

培育授精用雄蜂所用的父本蜂群。

3.2

贮王群queen-storingcolony用于暂时贮存蜂王的蜂群。

3.3

小核群nucleuscolony

人工组织的专供处女蜂王交配或人工授精期间生活的暂时性小蜂群。

3.4

处女蜂王virginqueen

未经交配或人工授精的蜂王。

4操作前的准备

4,1选择父群和母群

选择符合本品种要求且健康的蜂群分别作父群和母群。4.2培育雄蜂

人工授精前40d～50d向父群内加雄蜂脾培育雄蜂，出房时在其胸部背板上标记，雄蜂的数量按人工授精用蜂王的100倍培育。

4.3培育蜂王

人工授精前20d～24d培育蜂王。蜂王出房前一天，将其移入贮王群内或诱入到小核群里，巢门口安装隔王栅，防止处女蜂王飞出巢外交配。

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4,4准备授精室

采精前30min～60min对授精室清理并消毒处理。实验台面宜使用75%酒精擦拭消毒；室内空间宜使用紫外灯进行消毒。室内温度宜控制在25℃。

4.5准备人工授精器材

4.5.1准备人工授精仪、双目实体显微镜、背钩、腹钩、探针、5mL注射器、100μL进样器、授精针头、诱入器、麻醉器、C02钢瓶、胶管、洗气瓶、剪刀、镊子、酒精灯等器材。

4.5.2背钩、腹钩、探针、麻醉器、诱人器、剪刀、镊子、容量瓶等用蒸馏水冲洗干净，置于煮沸消毒器内，煮沸30min～60min；授精针头、进样器等不宜高温处理的器材，用75%的酒精棉球擦洗消

毒，然后再用生理盐水冲洗5次。4,6配制精液缓冲液

根据实际条件选用精液缓冲液配方，现用现配。常用的配方见附录A。

5采精

5.1捕捉雄蜂

选择出房12d后且带有标记的雄蜂。上午8时～11时捕捉时，从蜂群的边脾和框梁上选择粗壮、行动敏捷的雄蜂，将其放入飞翔笼内，供采精用；下午13时～17时捕捉时，在巢门口选择飞翔后归巢的雄蜂捕捉。

5.2灌注缓冲液

采精前，先用注射器将采精针头注满精液缓冲液，再将其安装于进样器上。5.3强迫排精

从雄蜂笼内提取雄蜂，先用拇指和食指抓住其胸部，并轻揉，再用另一只手的食指慢慢挤压腹部背板，强迫雄蜂阳茎外翻排精。

5.4采集精液

精液采集在显微镜下进行。采精时，注满精液缓冲液的针头先吸入3μL～4μL空气，将针头轻触雄蜂阳茎末端淡黄色精液表面，缓慢吸入精液，勿吸入白色粘液。根据授精需要，一次连续采集多只雄蜂的精液。舍弃触碰到雄蜂体躯或人手指的精液。采精后，针头应依次吸入3μL～4μL空气、5μL以上缓冲液作封闭处理。采集的精液尽快用于授精。不能及时利用的精液，需在避光室温条件下保存，2d内使用完毕。

6授精

6.1麻醉蜂王

将蜂王置入麻醉器内，推入通气活塞，让蜂王腹部露出3节～4节，然后安装到授精仪底座的固定器上。开启C02钢瓶阀门，控制流量调节旋钮至洗气瓶中每秒流出约5个气泡为宜。蜂王进入昏迷状态，直到授精完毕，方可解除麻醉。

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6.2注射精液

调整显微镜与授精仪、麻醉器和针头的相对位置，使处女蜂王的腹部尾端呈现在显微镜视野中央，麻醉器中线与针头在同一直线上，针头倾斜角度45°~60°为宜。用背钩和腹钩打开螫针腔，背、腹板的间距为5mm～6mm。排出针头内的缓冲液和空气，将针头缓缓插入蜂王阴道内。针头进入阴道的深度，西方蜜蜂为1.8mm、东方蜜蜂为1.0mm。根据需要控制精液注入总剂量和次数，西方蜜蜂宜为8μL，东方蜜蜂宜为6μL。

7授精蜂王的管理

蜂王人工授精后，在其胸部背板上点标记，然后将其诱入到蜂群或小核群内进行产卵观察。巢门口要装隔王栅，以免蜂王飞出巢外与其它雄蜂交配。人工授精正常的蜂王，在授精后4d～10d开始产卵。蜂王产卵后，即可撤去巢门口的隔王栅。

8档案记录

按照附录B做好人工授精过程中的档案记录，并长期保存，随蜂王使用。

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附录A（资料性）

蜜蜂精液缓冲液配方蜜蜂精液缓冲液配方见表A.1、表A.2和表A.3。

表A.1缓冲液配方1

成分

剂量

要求

二水柠檬酸三钠

2.430g

分析纯

碳