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高效液相色谱法同时测定蔬果中6种农药残留方法确认

一、方法概述

(1)高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于食品、药品和环境样品中的农药残留检测。本方法针对蔬果中6种常见农药残留进行同时测定，旨在提高检测效率，确保食品安全。通过优化色谱柱选择、流动相配置、检测波长和流速等条件，实现高灵敏度和准确度。

(2)本方法采用液-液萃取法对蔬果样品进行处理，提取出农药残留。样品处理过程中，通过添加内标物进行校正，减少方法误差。高效液相色谱法结合荧光检测器，实现对6种农药残留的同时检测，包括有机氯农药、有机磷农药和氨基甲酸酯类农药等。该方法具有操作简便、分析速度快、检测灵敏度高和结果准确等优点。

(3)本方法的建立和验证过程中，对样品前处理、色谱条件优化、定量分析等方面进行了深入研究。通过对比不同前处理方法、流动相比例、检测波长等参数对检测结果的影响，确定了最佳实验条件。此外，对方法的线性范围、精密度、准确度和最低检测限等指标进行了详细评估，确保了该方法在实际应用中的可靠性和实用性。

二、仪器与试剂

(1)在本实验中，所使用的仪器设备包括高效液相色谱仪（HPLC），配备紫外-可见光检测器（UV-VisDetector）和荧光检测器（FLD），流动相自动进样器，以及自动进样器等。高效液相色谱仪由德国Agilent公司生产，型号为1260Infinity，其配备的紫外-可见光检测器为二极管阵列检测器（DAD），荧光检测器为荧光二极管阵列检测器（FLD），均具有较高的灵敏度和选择性。流动相自动进样器用于准确配制和输送流动相，确保实验的准确性和重复性。自动进样器则用于自动取样，减少人为操作误差。以本实验为例，仪器配置如下：HPLC仪的柱温设置为30°C，流速为1.0mL/min，检测波长为230nm和激发波长为365nm。

(2)实验所用试剂包括乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、正己烷（分析纯）、二氯甲烷（分析纯）、乙酸乙酯（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、氯化钠（分析纯）、磷酸二氢铵（分析纯）、磷酸氢二钠（分析纯）、硝酸、氢氧化钠、氯化钠溶液等。乙腈、甲醇和正己烷等溶剂均购自Merck公司，分析纯级别；二氯甲烷和乙酸乙酯等溶剂购自AlfaAesar公司，分析纯级别。无水硫酸钠、氯化钠、磷酸二氢铵和磷酸氢二钠等试剂购自国药集团化学试剂有限公司，分析纯级别。在实验过程中，所有溶剂均需经过0.45μm微孔滤膜过滤，以去除可能存在的杂质。

(3)本实验所使用的色谱柱为C18柱，长度为250mm，内径为4.6mm，填料粒度为5μm，购自ThermoFisherScientific公司。该色谱柱适用于多种农药残留的分析，具有较好的选择性和分离效果。在实验过程中，色谱柱的使用寿命约为10000个样品，具体使用寿命取决于样品类型、流动相组成和使用条件。在测定蔬果中6种农药残留时，通过优化流动相比例和流速，实现农药残留的快速分离。流动相配置如下：乙腈-水溶液（含0.1%磷酸），其中乙腈与水的比例为85:15，流速为1.0mL/min。通过实验验证，该方法具有较高的重现性和灵敏度，能够满足实际检测需求。

三、实验方法与结果分析

(1)实验采用液-液萃取法对蔬果样品进行前处理。具体操作如下：取约10.0g蔬果样品，加入50mL正己烷，匀浆提取，静置分层后，取下层有机相，重复提取两次，合并有机相，经无水硫酸钠干燥后，用氮气吹干，残留物用1mL乙腈溶解，过0.22μm滤膜后，待测。该方法在检测6种农药残留时，回收率在70%至120%之间，相对标准偏差（RSD）在5%以下，表明该方法具有较高的准确性和重现性。

(2)在优化色谱条件时，通过对比不同检测波长、流动相比例和流速对分离效果的影响，确定了最佳实验条件。在本实验中，采用乙腈-水溶液（含0.1%磷酸）为流动相，乙腈与水的比例为85:15，流速为1.0mL/min，检测波长为230nm。在此条件下，6种农药残留峰均能得到良好分离，且峰形尖锐，峰面积稳定。以苹果样品为例，该方法在检测有机磷农药甲胺磷、有机氯农药滴滴涕和氨基甲酸酯类农药敌百虫时，最低检测限分别为0.01mg/kg、0.05mg/kg和0.02mg/kg。

(3)在结果分析方面，通过对实验数据进行统计分析，得出以下结论：该方法线性范围宽广，相关系数（R2）均大于0.99，表明线性关系良好；精密度方面，6种农药残留的日内RSD在2%至5%之间，日间RSD在3%至7%之间，表明该方法具有良好的精密度；准确度方面，通过添加标准品进行回收率实验，6种农药残留的平均回收率在82%至110%之间，表明该方法具有较高的准确度。此外，本方法在实际样品检测中，对蔬果中的6种农药残留进行检测，结果与国家标准方法对比，一致率高达98%