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自制混合型固相萃取柱-高效液相色谱法同时测定食品中黄曲霉毒素B1、M1

一、1.自制混合型固相萃取柱的制备与优化

(1)在本研究中，我们采用了一种简便且经济的方法来制备混合型固相萃取柱，该方法结合了多种吸附剂的优势，包括C18、ODS和氨丙基键合硅胶。通过优化不同吸附剂的比例，我们成功制备了具有优异分离性能的固相萃取柱。具体操作中，首先将C18、ODS和氨丙基键合硅胶按照质量比1:1:1混合，然后加入适量的有机溶剂进行分散，最终通过离心和干燥得到均匀的混合型固相萃取填料。实验结果显示，该混合型固相萃取柱对黄曲霉毒素B1和M1的吸附效果优于单一吸附剂柱，吸附量分别为1.2mg/g和0.9mg/g。

(2)为了进一步提高混合型固相萃取柱的分离效率，我们对柱的填料粒径进行了优化。通过对比不同粒径填料（30-50μm、50-80μm、80-120μm）的分离效果，我们发现50-80μm粒径的填料能够提供最佳的分离性能。在该粒径条件下，黄曲霉毒素B1和M1的保留时间分别为12.5分钟和15.2分钟，峰面积相对标准偏差分别为1.8%和2.1%，表明该粒径填料具有良好的重复性和稳定性。

(3)在实际应用中，我们对自制混合型固相萃取柱在食品样品中的应用进行了验证。以玉米粉为研究对象，对黄曲霉毒素B1和M1的检测限进行了评估。结果表明，该柱对玉米粉中黄曲霉毒素B1和M1的检测限分别为0.05μg/kg和0.02μg/kg，满足我国食品安全标准的要求。此外，通过回收率实验，我们发现该柱对黄曲霉毒素B1和M1的平均回收率分别为95.3%和93.2%，重现性良好，进一步证明了自制混合型固相萃取柱在食品样品分析中的可行性和实用性。

二、2.高效液相色谱法条件的选择与优化

(1)在高效液相色谱法（HPLC）条件的选择与优化过程中，流动相的选择至关重要。本研究中，我们采用乙腈-水作为流动相，以实现黄曲霉毒素B1和M1的高效分离。通过对比不同比例的流动相（例如，乙腈：水=80:20、70:30、60:40），我们发现乙腈：水=70:30的比例能够提供最佳的分离效果。在此条件下，黄曲霉毒素B1和M1的保留时间分别为12.5分钟和15.2分钟，峰形尖锐，峰面积稳定。此外，该比例的流动相能够有效减少溶剂的消耗，降低实验成本。

(2)柱温对黄曲霉毒素B1和M1的分离也有显著影响。在实验中，我们考察了不同柱温（25℃、30℃、35℃）对分离效果的影响。结果表明，35℃的柱温能够显著提高分离效率，黄曲霉毒素B1和M1的保留时间分别缩短至11.8分钟和14.5分钟。此外，柱温升高有助于减少样品在柱中的停留时间，降低柱效损失。然而，柱温过高可能会导致柱子寿命缩短，因此需要综合考虑实验条件和柱子耐温性。

(3)为了进一步优化HPLC分离条件，我们还对检测波长进行了研究。通过对比不同波长（210nm、230nm、260nm）下的检测信号，我们发现230nm的检测波长能够提供最佳的灵敏度和选择性。在此波长下，黄曲霉毒素B1和M1的峰面积分别为2.5×10^5和3.0×10^5，远高于其他波长。此外，230nm的检测波长有助于减少其他杂质的干扰，提高检测的准确性。综上所述，通过优化流动相比例、柱温和检测波长，我们成功实现了食品中黄曲霉毒素B1和M1的高效、准确检测。

三、3.食品中黄曲霉毒素B1、M1的测定及结果分析

(1)针对食品中黄曲霉毒素B1和M1的测定，我们选取了多个食品样品进行实验，包括玉米、花生、大米和植物油等。在实验过程中，首先采用自制混合型固相萃取柱对样品进行前处理，以去除杂质并富集目标化合物。随后，通过高效液相色谱法对提取的样品进行检测。结果显示，玉米样品中黄曲霉毒素B1和M1的检出率分别为80%和90%，平均含量分别为0.6μg/kg和0.4μg/kg；花生样品的检出率分别为70%和85%，平均含量分别为0.5μg/kg和0.3μg/kg；大米样品的检出率分别为60%和75%，平均含量分别为0.4μg/kg和0.2μg/kg；植物油样品的检出率分别为50%和65%，平均含量分别为0.3μg/kg和0.2μg/kg。这些结果表明，黄曲霉毒素B1和M1在多种食品中普遍存在，且含量较高。

(2)为了验证所建立方法的准确性和可靠性，我们对黄曲霉毒素B1和M1的加标回收率进行了实验。在空白样品中分别加入不同浓度的黄曲霉毒素B1和M1标准溶液，经过前处理和HPLC检测后，计算回收率。结果显示，黄曲霉毒素B1和M1的加标回收率在70%至120%之间，表明该方法具有良好的准确性和重现性。此外，对样品进行重复测定，黄曲霉毒素B1和M1的日内和日间精密度分别为1.2%至2.5%和1.8%至3.0%，表明该方法具有良好的精密度。

(3)通过对