植物生理学实验设计李桥善.ppt

实验目的1、学习用酒石酸铁比色法测定茶多酚含量的方法。2、了解茶多酚在植物抗氧化活性中的作用。3、对比茶树的老叶和嫩叶中茶多酚的含量。第2页,共11页，星期六，2024年，5月实验意义茶叶中茶多酚的含量与季节、维度的高低、老嫩程度等有关。通过实验找到茶多酚含量最多的再来进行茶多酚的提取，会大大提高提取率。第3页,共11页，星期六，2024年，5月实验原理茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。是一种重要的天然抗氧化性物质。它是超氧阴离子自由基和羟自由基的强捕获剂，能清除自由基。用酒石酸铁比色法测定植物组织中的茶多酚含量。第4页,共11页，星期六，2024年，5月实验用具及药品实验仪器与用具分光光度计、离心机、研钵、水浴锅、移液管、烘箱、具塞三角瓶实验试剂0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.8）100μg/ml儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至100ml。1.5%酒石酸钾铁第5页,共11页，星期六，2024年，5月实验步骤1.分别称取同一颗茶树的老叶和嫩叶各1g，研磨成粉末。分别用50ml沸蒸馏水将粉末洗入2个三角瓶，于沸水浴中浸提20min，过滤，滤渣50ml蒸馏水同样提取一次，分别合并上清液5000r/min离心15min，分别取上清液待用。2.将茶素标准溶液稀释成0、20、40、60、80、100μg/ml，分别吸取1ml，加0.1mol/L磷酸缓冲液3ml，混匀，加1.5%酒石酸钾铁1ml，用分光光度计测定540nm处的OD值，并绘制浓度-OD标准曲线。3.分别取样品提取液1ml，按上述同意方法测定540nm处的OD值。第6页,共11页，星期六，2024年，5月流程图茶素标准液稀释0、20、40、60、80、100ug/ml分别取lml加0.1mol/L磷酸缓冲液3ml混匀1.5%酒石酸钾铁1ml在540nm处测A分别取老嫩茶叶1g研磨分别加入2个带50ml蒸馏水的烧瓶中沸水浴20min过滤重复提取滤液于5000r/min离心15min分别取1ml上清液重复上述实验测A值滤渣第7页,共11页，星期六，2024年，5月注意事项注意：如果提取时间过长，所提的茶多酚会发生氧化反应，转化成其他物质，致使一部分茶多酚丢失。如果提取时间在1~2h对茶多酚含量的影响不大。所以要控制好提取时间。第8页,共11页，星期六，2024年，5月应用前景茶多酚具有很强的抗氧化性和生理活性,是人体自由基的清除剂。据有关部门研究证明，1毫克茶多酚清除对人机体有害的过量自由基的效能相当于9微克超氧化物歧化酶(SOD)，大大高于其他同类物质。茶多酚有阻断脂质过氧化反应，清除活性酶的作用。据日本奥田拓勇试验结果，证实茶多酚的抗衰老效果要比维生素E强18倍。第9页,共11页，星期六，2024年，5月有助于抑制心血管疾病茶多酚对人体脂肪代谢有着重要作用。人体的胆固醇、三酸甘油脂等含量高后形成动脉粥样化斑块等心血管疾病。茶多酚有助于使这种斑状增生受到抑制，从而抑制动脉粥化样硬。有助于预防和抗癌茶多酚可以阻断多种致癌物质在体内合成,并具有直接杀伤癌细胞和提高机体免疫能力的功效。有助于预防和治疗辐射伤害茶多酚及其氧化产物具有吸收放射性物质锶90和钴60毒害的能力。第10页,共11页，星期六，2024年，5月第11页,共11页，星期六，2024年，5月