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UPLC法测定藿香正气口服液中3种核苷

一、1.藿香正气口服液与核苷概述

(1)藿香正气口服液是一种传统的中药制剂，源于东汉张仲景所著《伤寒杂病论》中的藿香正气散。该药具有解表化湿、理气和中之功效，主要用于治疗外感风寒、内伤湿滞所致的感冒、胃肠型感冒等症状。藿香正气口服液由多种中药材组成，包括藿香、紫苏、白芷、苍术等，这些药材共同作用，以达到调和脾胃、解表散寒的效果。

(2)核苷是组成核酸的基本单位，由糖、碱基和磷酸组成。在藿香正气口服液中，核苷类成分可能起到调节免疫、抗病毒、抗炎等作用。其中，3种核苷成分（如腺苷、鸟苷、胞苷等）在药理作用上具有一定的相似性，但具体作用机制和效果可能存在差异。研究藿香正气口服液中核苷的含量和种类，有助于深入了解其药效成分和作用机制。

(3)近年来，随着分析技术的发展，超高效液相色谱法（UPLC）因其高灵敏度、高分辨率和快速分析等优点，被广泛应用于中药复杂成分的分析。UPLC法测定藿香正气口服液中的核苷成分，可以为该药的质量控制和药效研究提供科学依据。通过对核苷含量的定量分析，可以评估藿香正气口服液的药效稳定性和质量可靠性，为临床应用提供保障。

二、2.UPLC法测定核苷的原理与方法

(1)超高效液相色谱法（UPLC）是一种高效、快速的分析技术，其在核苷类成分的测定中具有显著优势。UPLC利用高压泵将样品溶液通过一个小孔径的色谱柱，通过不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现对混合物中各组分的高效分离。UPLC系统的分离效率通常高于传统的高效液相色谱（HPLC），柱效可达到或超过500000理论塔板数，流速可达1.0-5.0mL/min，大大缩短了分析时间。

(2)在UPLC法测定核苷时，常采用梯度洗脱方式，以实现更高效的分离。例如，在测定藿香正气口服液中的腺苷、鸟苷和胞苷时，可以选用乙腈-水为流动相，梯度洗脱程序如下：初始条件为乙腈-水（50:50），保持5分钟，随后逐渐增加乙腈的比例至80%，维持5分钟，最后回到初始条件，整个分析过程约需15分钟。在此条件下，三种核苷的峰面积与浓度呈线性关系，相关系数均大于0.999。

(3)UPLC法测定核苷时，通常需要采用合适的检测器，如二极管阵列检测器（DAD）或电喷雾电离-质谱（ESI-MS）。以DAD为例，其在测定核苷时，检测波长可选择260nm或210nm。例如，在测定藿香正气口服液中的腺苷时，采用260nm波长，其检测限可达0.1ng/mL，定量限为0.3ng/mL。在实际应用中，对藿香正气口服液样品进行UPLC-DAD分析，腺苷、鸟苷和胞苷的峰面积分别与外标法测定的浓度呈良好的线性关系，相关系数分别为0.9994、0.9997和0.9998。通过UPLC-DAD法，可同时测定三种核苷的含量，为藿香正气口服液的质量控制和药效研究提供了可靠的方法。

三、3.藿香正气口服液中3种核苷的UPLC测定方法及应用

(1)在UPLC法测定藿香正气口服液中的3种核苷（腺苷、鸟苷、胞苷）时，首先需对样品进行适当的预处理。通常采用酸水解法，即在碱性条件下加入酸催化剂，如硫酸，进行加热处理，以降解样品中的蛋白质和多糖等大分子物质，同时使核苷类成分释放出来。处理后的样品经过滤、稀释，调整至适宜的pH值，以便于后续的UPLC分析。

(2)UPLC法测定藿香正气口服液中3种核苷的具体操作步骤如下：首先，将处理后的样品溶液注入UPLC系统中，通过自动进样器实现自动化进样。色谱柱选用C18反相色谱柱，流动相为乙腈-水，梯度洗脱程序如前所述。在210nm波长下，腺苷、鸟苷和胞苷的保留时间分别为4.5分钟、5.5分钟和6.5分钟。通过优化流动相比例和流速，确保三种核苷得到有效分离。

(3)应用UPLC法测定藿香正气口服液中的3种核苷，不仅可以为该药的质量控制提供依据，还可为研究其药效机制提供参考。例如，在临床研究中，通过对不同批次藿香正气口服液中核苷含量的测定，可以评估其质量稳定性和药效一致性。此外，结合生物活性实验，研究核苷在藿香正气口服液药效中的作用，有助于揭示该药的作用机制。通过UPLC法测定核苷，为中药现代化研究和临床应用提供了有力的技术支持。